يوصف بروتوكول لتسليم ينترادوكتال غير الغازية من الكواشف مائي في الغدة الثديية الماوس. طريقة يستفيد من الحقن الموضعي في الحلمات من الغدد الثديية التي تستهدف القنوات الثديية على وجه التحديد. هذه التقنية قابلة للتكيف لمجموعة متنوعة من المركبات بما في ذلك سيرنا، وكلاء العلاج الكيميائي والجزيئات الصغيرة.
هنا نحن تصف بروتوكول لتقديم مختلف الكواشف الغدة الثديية للفأر عن طريق الحقن ينترادوكتال. وكانت العقاقير الموضعية وتدق إلى أسفل من الجينات داخل الظهارة الثديية من الصعب تحقيق ذلك بسبب عدم وجود جزيئات تستهدف المناسبة التي هي مستقلة عن مراحل النمو مثل الحمل والرضاعة. هنا، نحن تصف تقنية لتسليم المترجمة من الكواشف إلى الغدة الثديية في أي مرحلة في مرحلة البلوغ عن طريق الحقن ينترادوكتال في الحلمات من الفئران. الحقن يمكن أن يؤديها على الفئران الحية، تحت التخدير، والسماح لتسليم المخدرات غير الغازية والمترجمة إلى الغدة الثديية. علاوة على ذلك، يمكن تكرار الحقن على مدى عدة أشهر دون الإضرار الحلمة. الأصباغ الحيوية مثل ايفانز الأزرق هي مفيدة جدا لتعلم هذه التقنية. عند حقن ينترادوكتال من الصبغة الزرقاء، يصبح شجرة الأقنية بأكملها مرئية للعين. علاوة على ذلك، الكواشف fluorescently المسمى تسمح أيضا للالتصور والتوزيع داخل الغدة الثديية. هذه التقنية قابلة للتكيف لمجموعة متنوعة من المركبات بما في ذلك سيرنا، وكلاء العلاج الكيميائي، والجزيئات الصغيرة.
وتتألف الغدة الثديية الماوس من شجرة الأقنية السنخية المعقدة التي يتقاطع في القناة المركزية في الحلمة. في الفئران، وكذلك البشر، فإن غالبية أورام الثدي تنشأ في الخلايا الظهارية المبطنة لقنوات الحليب. وتشمل العلاجات المتاحة حاليا العلاج الكيميائي عن طريق الوريد، والإشعاع، والجراحة. تم استكشاف علاجات موضعية ينترادوكتال 1-3 وتقدم مزايا كبيرة من حيث انخفاض السمية والآثار الجانبية. ومع ذلك، لا تزال هناك العديد من التحديات أمام هذه يمكن تطبيقها على نطاق أوسع. القدرة على تنفيذ إجراءات مماثلة في الغدة الثديية الماوس يسهل توصيف تدخلات ينترادوكتال. ونحن هنا نقدم وسيلة غير الغازية لتسليم الكواشف مباشرة في الماوس الثديية لاصق.
وقد سبق أن أظهرت تسليم ينترادوكتال من العلاج الكيميائي وكلاء في كل من مرضى سرطان الثدي ونماذج الماوس لتكون فعالة للغاية مع عدم وجود دليل علىسمية جهازية أو التشريحية المرضية على المدى الطويل يغير 3-6. علاوة على ذلك، وقد ثبت أن حقن الخلايا السرطانية وlentiviral تسليم ناقلات الجينات المسرطنة في السابق ليكون ممكنا عن طريق الحقن ينترادوكتال 7-10.
بالإضافة إلى تقديم الأدوية، وهذا الإجراء مفيد لإسكات الجينات المحلية من الغدة الثديية من خلال حقن ينترادوكتال من سيرنا. حقن كميات صغيرة من محلول سيرنا فعالة دون تغيير علم التشريح وعلم وظائف الأعضاء من الغدة الثديية. في المختبر لدينا أظهرنا مؤخرا إسكات ناجحة من الجينات سيط رئيسي في الفئران المعدلة وراثيا التي تتطور بشكل عفوي الأورام الثديية الناتجة في الوقاية من الأورام التقدم (بروك وآخرون، غير منشورة). كنا قادرين على تكرار الحقن كل أسبوعين في نفس الحلمات تصل إلى 7 مرات في فترات 2 أسابيع مع عدم وجود تلف الأنسجة مرئية أو سمية.
حقن ينترادوكتال يمكن توقيتها في الماوس الكبار لمعالجة جمعةالأحداث opmentally محددة ذات الصلة بالتنمية الغدة الثديية أثناء الحمل والرضاعة، وارتداد أو لاستهداف مراحل لاحقة خلال تطور الورم والتقدم. عذراء الإناث يتجاوزن 8 أسابيع من العمر وقد تم حقن غير جراحية في مختبرنا.
المعدلة وراثيا وخروج المغلوب الفئران هي أدوات لا تقدر بثمن لدراسة دور الجينات في الجسم الحي الفردية في سرطان الثدي. ومع ذلك، فإنه مكلف وتوليد هذه الحيوانات تستغرق وقتا طويلا وضربة قاضية الجين هو عادة في كل مكان ما يحول دون لنا في بعض الأحيان من التعرف على آثار محددة من هذا الجين على الغدة الثديية. وبالتالي، فإن ضربة قاضية استهدفت تخفيف القضايا من الآثار الجانبية والسميات غير محددة في الأجهزة الأخرى.
حقن ينترادوكتال من سيرنا المعروضة هنا تمكن ضربة قاضية الجينات المترجمة في الماوس الغدة الثديية. بل هو طريقة سريعة لتسليم المخدرات المستهدفة والمترجمة إلى الغدة الثديية لا تقتصر على تسليم سيرنا. مثل هذا الثديية تسليم المخدرات الغدة محددة غير محددة يتجنب الآثار الجانبية والسمية إلى أعضاء أخرى، ويسمح لدراسة التعديلات الجينات في نقطة زمنية محددة خلال التنمية الغدة الثديية وتشكيل الورم الثدي. ليس هناك أي دليل من الاشتراكيةجزيئات الحمض النووي الريبي في الغدد غير حقن، والكبد أو الأجهزة الأخرى التي تقدم دليلا إضافيا على أن يقدم هذا الأسلوب وسيلة مفضلة للالمترجمة ضربة قاضية الجينات في الغدة الثديية. وعلاوة على ذلك، فإن حقن ينترادوكتال يمكن أن تتكرر أسبوعيا أو كل أسبوعين على مدى عدة أشهر للسماح لرصد طويل الأجل من العوامل العلاجية.
هذه التقنية يفتح إمكانية لمعايرة تسليم ينترادوكتال من مختلف الكواشف إلى القنوات الثديية الماوس. يجب التقدم في تسليم المترجمة في نماذج الماوس جيدا اتسم تسريع تطبيق غير الغازية، استهدفت الاستراتيجيات العلاجية في البشر.
The authors have nothing to disclose.
فإن الكتاب أود أن أشكر مايكل غولدبرغ لإعداد استقرت حل سيرنا وهيذر توبين لمساعدتها مع الحيوانات. وقد تم تمويل هذه الدراسة من قبل وزارة الدفاع جائزة مبتكر W81XWH-08-1-0659 لDEI. وأيد تدريب ما بعد الدكتوراه من SK من قبل مؤسسة سوزان كومن G (KG101329). فإن الكتاب أود أن أشكر كريستين جونسون لإعداد التخطيطي.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
isoflurane | 2-4% | ||
meloxicam | 5-10 mg/ml | ||
Evans blue dye | Sigma-Aldrich | E2129-10G | 0.2% in PBS |
hair removing cream | Veet | Choose sensitive option | |
stereoscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
micro-dissecting tweezers | Roboz | rs-4976 | With a 0.10 x 0.06 mm tip made of dumostar |
Hamilton syringe | Hamilton | 7637-01 | |
33-gauge needle | Hamilton | 7803-05 | point style 4, 12 degree bevel (standard) |
siGLO cyclophilin B control siRNA | Dharmacon | D-001610-01-05 |