Hücre biyolojisinde temel bir arayış ökaryotik hücrelerin yapmak organellerin kimliği altında yatan mekanizmaları belirlemektir. Burada floresan mikroskobu ve yeni nesil dizileme araçlarını kullanarak bitki organel morfolojik ve fonksiyonel bütünlüğü sorumlu genleri tanımlamak için bir yöntem öneriyoruz.
Bu protokol Arabidopsis fidelerinin bir floresan mikroskop tabanlı tarama açıklanır ve sekretuar yolun belirli bir etiketli floresan marker Subselüler dağılımını değiştirebilir resesif mutasyonlar eşlemek anlatılmaktadır. Arabidopsis nedeniyle genom büyüklüğü genetik çalışmalar için güçlü bir biyolojik model, nesil zaman ve krallıkları arasında moleküler mekanizmaları korunması. Moleküler belirteçler dayalı geleneksel yönteme alternatif olarak mutasyon eşlemek için bir yaklaşım olarak genotipleme dizi nispeten hızlı olduğu için avantajlı olduğunu ve gerçekten çok kısa süre içerisinde birçok mutantların haritalama izin verebilir. Bu yöntem, bitkilerde herhangi bir organelidir bütünlüğünü etkileyebilir proteinlerin tanımlama sağlar. Burada bir örnek olarak, endoplazmik retikulum (ER) bütünlüğü için önemli gen haritası için bir ekran öneriyoruz. Bizim yaklaşımımız, ancak kolayca diğer bitki hücre organelleri uzatılabilir(Örneğin 1,2 bakınız), ve böylece diğer hücre içi yapıları düzenleyen moleküler temelini anlamaya yönelik önemli bir adımı temsil etmektedir.
Burada endomembrane mutantların tanımlanması için bir konfokal mikroskopi tabanlı tarama nitelendirdi. Bu yaklaşım kolaylıkla spesifik floresan protein belirteçler mevcut olduğu hücrenin diğer organelleri kadar uzatılabilir. Ekran hedef organel veya işaretleyici içeren gerekiyordu değil organeller için ya floresan işaretleyici bir anormal dağılım gösteren mutantların tanımlanması dayanmaktadır. Sırasıyla, bu mutantlar işaretleyici subcompartimentalize için organel yeteneği ya tehlikeye dü…
The authors have nothing to disclose.
Biz Kimyasal Bilimler, Yer Bilimleri ve Biyolojik Bilimler Bölümü, Temel Enerji Bilimler, Fen Dairesi, ABD Enerji Bakanlığı (ödül sayısı DE-FG02-91ER20021) ve Ulusal Bilim Vakfı (MCB 0.948.584) (FB) Müdürlüğü tarafından destek için minnettarım. Biz yazının düzenleme için Bayan Karen Kuş minnet borçluyuz.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Ethylmethane sulfonate | Sigma | M0880 |
NaOH | J.T Baker | 3722-05 |
Murashige skoog basal medium w gamborg vitamins | Phyto technolog laboratorie | M404 |
Phytagel | Sigma | P8169-1Kg |
RNeasy mini kit | Qiagen | 74104 |
Master pure plant leaf DNA purification kit | Epicentre | MPP92100 |
Bioprime DNA labeling system | Invitrogen | 18094-011 |
Alcohol 200 proof | Decan laboratories inc. | 2716 |
NaOAc | J.T Baker | |
Gene chip Arabidopsis ATH1 genome array | Affymetrix | 900385 |
Falcon tubes 50 mL | corning | 430290 |
Eppendorf tubes 1.5 mL | ||
Filter paper 90mm | Whatman | 1001090 |
Analytical Balance | Mettler Toledo AB54-S | n.a |
Nutating (wave) shaker | Heidolph polymax 1040 | n.a |
Centrifuge | Eppendorf 5417-R | n.a |