がくからパッチクランプの静電容量の録音のための方法

Summary

Abstract

私たちは、開催のがくにおけるシナプス前のパッチクランプ記録、哺乳類の中枢神経系の神経終末のための基本的な手法を示します。シナプス前終末からの電気の録音は、活動電位、カルシウムチャネル電流、小胞融合（エキソサイトーシス）と、その後の膜の取り込み（エンドサイトーシス）の測定を可能にする。神経伝達物質を含む小胞の融合は、小胞膜ががくの細胞膜に追加されます。細胞膜の量のこの増加は、容量の増加として測定されます。静電容量で、その後の減少は、エンドサイトーシス、萼の膜から細胞膜への取り込みや削除のプロセスを示している。エンドサイトーシスは、がくの構造を維持するために必要であり、それはまた将来のエキソサイトーシスのイベントのための神経伝達物質で満たされる小胞を形成する必要がある。ハンドヘルドのがくでの容量の記録により、直接、急速に小胞放出と哺乳類の中枢神経系の神経終末の後続のエンドサイトーシスを測定するために作られている。さらに、対応する後シナプス活性が同時にペアの録音を使用して測定することができます。したがって、中枢神経系のシナプスにおけるシナプス前及びシナプス後の電気的活動の全体像は、この準備を用いて達成可能です。ここでは、スライスの準備、開催される基本的なパッチクランプ技術の腎杯の識別のための形態学的特徴、及びエキソサイトーシスとエンドサイトーシスを測定する静電容量の記録の例のための方法が提示されます。

Protocol

パッチクランプの設定： 光学系：良いセルを見つけるために、そしてそれの位置を確立するために光学系は非常に重要である。 鋭いエッジ、柔らかそうに見えるセル：セルのクリアな画像を取得してください。 添付の萼との良好なMNTB主細胞を探すためにフィールド全体をスキャンします。別の角度から腎杯を探す?…