Birçok enfeksiyonları güçlü bir CTL yanıtı ortaya çıkarmak, fakat bazen yanıt hücrelerinin miktarı patojenin kontrol etmek için orantılı değildir<sup> 1</sup>. CTL kaliteli bir önlem özellikle öldürmek için yeteneklerini<sup> 2</sup>. Hedef hücrelerin KAKE etiketleme bu CTL yanıt kalitesini araştırmak için kullanılabilir<em> In vivo</em<sup> 3,4</sup>.
Carboxyfluorescein diasetat succinimidyl ester (KAKE) kolay ve hızlı bir şekilde in vivo soruşturma ilgi bir hücre popülasyonu etiket kullanılabilir. Bu etiketleme klasik çoğalması ve göç çalışması için kullanılır olmuştur. Burada sunulan yöntem, epitop KAKE etiketli hedef hücreleri 4-6 hayatta kalma ve öldürme bakmak için evlatlık transferinden sonra, zaman çizelgesi kısaltılmış var. Miktarları yanıltıcı olabilir gibi spesifik CD8 + T hücre klonu öldürme seviyesi, kalite yanıt gösterebilir. CD8 + T hücreleri, sitokin üretimi ve öldürme 7,8 düşüş zaman içinde işlevsel olarak tükenmiş olabilir Özgül. Ayrıca, belirli CD8 + T hücre klonlar TCR özgüllükleri 9 farklı yanı sıra diğerleri gibi öldürmek olmayabilir. Etkili Hücre aracılı bağışıklık (CMI), antijenler, T hücreleri yanıt yeterli sayıda sadece üreten tespit değil, aynı zamanda işlevsel olarak sağlam bir yanıt T hücreleri olmalıdır. Burada iki peptid BALB / c farelerde spesifik T hücre klonları yüzde hücre özel öldürme değerlendirir.
KAKE döl 10,11 arasında nispeten eşit böler, çünkü bu testte, klonal genişleme de dahil olmak üzere hücrelerin proliferatif kapasitesi araştırmak için değiştirilebilir. Örneğin tetramers ve biyoparlaklık 13, KAKE etiketleme ile kombine edilebilir hipoteze göre daha uygun olabilir yöntemleri diğer hücre izleme, var olmasına rağmen, hücre göçü 6,12 araştırmak için KAKE etiketleme kullanmak da mümkün.
PE de işe yaramayabilir ise…
The authors have nothing to disclose.
Bianca MOTHE Carla Oseroff ve Marie-France DelGuercio immünolojik testleri ve fare kullanımı için beni tanıştırdığı için teşekkür etmek istiyorum. GA Splitter laboratuarda çalışma NIH hibe 1-RO1-AI-073.558, GLRCE hibe 1-U54-AI-057.153, BARD ABD-3829-06 tarafından finanse edilmektedir.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
1 mm glass beads | Biospec Products | 11079110 | ||
70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
96-well plate | Costar | 3799 | ||
Adjulite Incomplete Freund’s Adjuvant | Pacific Immunology | n/a | ||
DMSO | Sigma | D-5879 | ||
FBS | GIBCO | 16000-077 | ||
FC 500 Flow Cytometer | Beckman Coulter | n/a | ||
Kontes glass tissue grinder | Kontes | 885300-0015 | ||
Mini Beadbeater | Biospec Products | n/a | ||
Needle | B-D | 305175 | ||
Parafilm “M” | Pechiney Plastic Packaging | PM992 | ||
Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 157-8 | ||
PBS | GIBCO | 10010-023 | ||
PharmLyse lysing reagent | BD Biosciences | 555899 | ||
RPMI 1640 | GIBCO | 11875-093 | ||
Syringe | B-D | 309602 | ||
Vybrant CFSE Kit | Invitrogen (Molecular Probes) | V12883 |