Enzim-linked immünospot Testi (ELISPOT): Th-1 Mikrobiyal antijenlere karşı hücresel immün cevaplar Kantitasyonu
Summary
Adaptif bağışıklık idiyopatik hastalıklar mikrobik hedeflerin belirlenmesi, enzim bağlı immünospot testinin kullanımı yapılabilir.
Abstract
Adaptif bağışıklık hücre içi patojenlerin temizlenmesi için önemli bir bileşenidir. İnsanlarda bu tepkileri algılamak ve ölçmek için yeteneği önemli bir tanı aracıdır. Enzyme-linked immünospot assay (ELISPOT), transplantasyon ile HIV enfeksiyonu olanlar gibi bağışıklık sistemi baskılanmış popülasyonları ve steroid kullanımı da dahil olmak üzere, mikrobiyal antijenlere karşı hücresel immün yanıtları belirlemeye kabiliyetini popülerlik kazanıyor. Bu test spesifik mikrobiyal antijenlere karşı bağışıklık yanıtları yanı sıra, bu yanıtları karakter Th1 veya Th2 ayırt ölçmek için kapasitesine sahiptir. ELISPOT inflamasyon site ile sınırlı değildir. Bu onun yeteneği yanı sıra periferik kan, bronkoalveoler lavaj, beyin omurilik sıvısı ve assit olarak aktif katılımı siteleri içinde bağışıklık yanıtlarını değerlendirmek için çok yönlüdür. Tek veya birden fazla antijene karşı bağışıklık yanıtlarını tespiti mümkündür yanı sıra mikrobiyal proteinler içinde belirli epitoplar. Bu testte, zamanla bağışıklık yanıtlarını tespiti yanı sıra konak T hücreleri tarafından tanınır antijenleri ayrımlar kolaylaştırır. Çift renkli ELISPOT testleri aynı anda iki sitokinlerin ifade tespiti için kullanılabilir. Bu teknik için yeni uygulamalar ekstrapulmoner tüberküloz tanısı yanı sıra otoimmün hastalıklar bulaşıcı antijenlerin katkısının araştırılması.
Protocol
Discussion
ELISPOT testi insanlarda bağışıklık yanıtlarını izlemek için en önemli ve en yaygın olarak kullanılan testlerin biri olarak ortaya çıktı ve diğer türlerin bir çeşitlilik vardır. ELISPOT testi ile, bağışıklık hücre frekansları hücre popülasyonlarının genişleme veya manipülasyon olmadan tek hücre düzeyinde ölçülebilir. ELISPOT testinin yaygın enfeksiyon, kanser, alerji ve otoimmün hastalıklar da dahil olmak üzere çeşitli hastalıklarda antijen spesifik bağışıklık yanıtlar?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vanderbilt CTSA hibe 1 UL1 RR024975, Ulusal Araştırma Kaynakları, Ulusal Sağlık Enstitüleri için Merkezi tarafından kısmen desteklenir. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü, R01 HL 83.839 tarafından finanse edildi; R01 AI 65.744.
Materials
A. Preparation of Media
B. Preparation of Tris Buffer
- Add 800 ml of ddH2O to 1 L beaker.
- Measure 12 grams of Tris and add to the beaker.
- Add 0.12 grams of magnesium chloride hexahydrate (MgCl2:6H2O) into the beaker.
- Stir with magnetic stirring rod on automatic stirring plate.
- Once dissolved, pH the solution to 9.5.
- Add 200 mL of ddH2O to the beaker, bringing it up to 1000mL.
- Filter the solution with a 0.22 μm filter.
C. Materials necessary for ELISPOT analysis:
References
- Dosanjh, D. P., Hinks, T. S., Innes, J. A., Deeks, J. J., Pasvol, G., Hackforth, S., Varia, H., Millington, K. A., Gunatheesan, R., Guyot-Revol, V., Lalvani, A. Improved diagnostic evaluation of suspected tuberculosis. Ann Intern Med. 148, 325-336 (2008).
- Sung, H. K. E. Diagnosis of abdominal tuberculosis by T-cell based assays on peripheral blood and peritoneal fluid mononuclear cells. Journal of Infection. 59, 409-415 (2009).
- Kim, S. -. H. Diagnosis of Central Nervous System Tuberculosis by T-Cell-Based Assays on Peripheral Blood and Cerebrospinal Fluid Mononuclear Cells. Clinical and Vaccine Immunology. , 1356-1362 (2008).
- Drake, W. P., Dhason, M. S., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Vadivelu, S., Hajizadeh, R., Newman, L. S., Kalams, S. A. Cellular recognition of Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 and KatG peptides in systemic sarcoidosis. Infect Immun. 75, 527-530 (2007).
- Allen, S. S., Evans, W., Carlisle, J., Hajizadeh, R., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Pride, D. T., Johnson, J. E., Drake, W. P. Superoxide dismutase A antigens derived from molecular analysis of sarcoidosis granulomas elicit systemic Th-1 immune responses. Respir Res. 25, 36-36 (2008).
- Mutsvangwa, J., Millington, K. A., Chaka, K., Mavhudzi, T., Cheung, Y. B., Mason, P. R., Butterworth, A. E., Corbett, E. L., Lalvani, A. Identifying recent Mycobacterium tuberculosis transmission in the setting of high HIV and TB burden. Thorax. 65, 315-320 (2010).
- Streeck, H., Frahm, N., Walker, B. D. The role of IFN-gamma Elispot assay in HIV vaccine research. Nat Protoc. 4, 461-469 (2009).
- Chaudhary, N., Staab, J. F., Marr, K. A. Healthy human T-Cell Responses to Aspergillus fumigatus antigens. PLoS One. 5, e9036-e9036 (2010).
- Manigold, T., Mori, A., Graumann, R., Llop, E., Simon, V., Ferr, S. M., Valdivieso, F., Castillo, C., Hjelle, B., Vial, P. Highly differentiated, resting gn-specific memory CD8+ T cells persist years after infection by andes hantavirus. PLoS Pathog. 6, e1000779-e1000779 (2010).
- Ndongala, M. L., Kamya, P., Boulet, S., Peretz, Y., Rouleau, D., Tremblay, C., Leblanc, R., Côté, P., Baril, J. G., Thomas, R., Vézina, S., Boulassel, M. R., Routy, J. P., Sékaly, R. P., Bernard, N. F. Changes in function of HIV-specific T-cell responses with increasing time from infection. Viral Immunol. 2, 159-168 (2010).
