酵素結合Immunospotアッセイ（ELISPOT）：微生物の抗原に対してのTh - 1細胞性免疫応答の定量化
Summary
特発性疾患における適応免疫の微生物のターゲットの同定、酵素結合immunospotアッセイの使用により達成することができます。
Abstract
適応免疫は、細胞内病原体のクリアランスに重要なコンポーネントです。ヒトではこれらの応答を検出し、定量化する能力は重要な診断ツールです。酵素結合immunospotアッセイ（ELISPOT）は、HIV感染、移植患者など免疫抑制集団、およびステロイドの使用を含む、微生物抗原に対して細胞性免疫応答を識別する能力のため人気を集めている。このアッセイは、特定の微生物の抗原に対する免疫応答を定量化する能力を有し、同様にこれらの応答がTh1または文字のTh2のかどうか区別する。 ELISPOTは、炎症部位に限定されるものではない。それは、末梢血、だけでなく、気管支肺胞洗浄液、脳脊髄液、腹水など、積極的な関与のサイト内での免疫応答のために評価する能力に汎用性があります。単一または複数の抗原に対する免疫応答の検出が可能であるだけでなく、微生物のタンパク質内の特定のエピトープ。このアッセイは、時間の経過とともに免疫応答の検出だけでなく、ホストのT細胞が認識する抗原の違いを容易にします。デュアルカラーELISPOTアッセイは、2つのサイトカインの同時発現の検出のために用意されています。このテクニックのための最近のアプリケーションは、肺外結核の診断だけでなく、自己免疫疾患に感染抗原の寄与の検討が含まれています。
Protocol
Discussion
ELISPOTアッセイは、ヒトおよび他の種の様々な免疫応答を監視するために最も重要で広く使用されているアッセイの一つとして浮上している。 ELISPOTアッセイにより、免疫細胞の頻度は、細胞集団の拡大または操作することなく、単一細胞レベルで測定することができます。 ELISPOTアッセイは広く感染症、がん、アレルギー、自己免疫疾患を含む種々の疾患で抗原特異的免疫応答を調査するた?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
研究資源、国立衛生研究所のナショナルセンターからバンダービルトCTSA助成金1 UL1 RR024975によって部分的にサポート。この作品は、NIHのR01 HL 83839によって賄われていた。R01 AI 65744。
Materials
A. Preparation of Media
B. Preparation of Tris Buffer
- Add 800 ml of ddH2O to 1 L beaker.
- Measure 12 grams of Tris and add to the beaker.
- Add 0.12 grams of magnesium chloride hexahydrate (MgCl2:6H2O) into the beaker.
- Stir with magnetic stirring rod on automatic stirring plate.
- Once dissolved, pH the solution to 9.5.
- Add 200 mL of ddH2O to the beaker, bringing it up to 1000mL.
- Filter the solution with a 0.22 μm filter.
C. Materials necessary for ELISPOT analysis:
References
- Dosanjh, D. P., Hinks, T. S., Innes, J. A., Deeks, J. J., Pasvol, G., Hackforth, S., Varia, H., Millington, K. A., Gunatheesan, R., Guyot-Revol, V., Lalvani, A. Improved diagnostic evaluation of suspected tuberculosis. Ann Intern Med. 148, 325-336 (2008).
- Sung, H. K. E. Diagnosis of abdominal tuberculosis by T-cell based assays on peripheral blood and peritoneal fluid mononuclear cells. Journal of Infection. 59, 409-415 (2009).
- Kim, S. -. H. Diagnosis of Central Nervous System Tuberculosis by T-Cell-Based Assays on Peripheral Blood and Cerebrospinal Fluid Mononuclear Cells. Clinical and Vaccine Immunology. , 1356-1362 (2008).
- Drake, W. P., Dhason, M. S., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Vadivelu, S., Hajizadeh, R., Newman, L. S., Kalams, S. A. Cellular recognition of Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 and KatG peptides in systemic sarcoidosis. Infect Immun. 75, 527-530 (2007).
- Allen, S. S., Evans, W., Carlisle, J., Hajizadeh, R., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Pride, D. T., Johnson, J. E., Drake, W. P. Superoxide dismutase A antigens derived from molecular analysis of sarcoidosis granulomas elicit systemic Th-1 immune responses. Respir Res. 25, 36-36 (2008).
- Mutsvangwa, J., Millington, K. A., Chaka, K., Mavhudzi, T., Cheung, Y. B., Mason, P. R., Butterworth, A. E., Corbett, E. L., Lalvani, A. Identifying recent Mycobacterium tuberculosis transmission in the setting of high HIV and TB burden. Thorax. 65, 315-320 (2010).
- Streeck, H., Frahm, N., Walker, B. D. The role of IFN-gamma Elispot assay in HIV vaccine research. Nat Protoc. 4, 461-469 (2009).
- Chaudhary, N., Staab, J. F., Marr, K. A. Healthy human T-Cell Responses to Aspergillus fumigatus antigens. PLoS One. 5, e9036-e9036 (2010).
- Manigold, T., Mori, A., Graumann, R., Llop, E., Simon, V., Ferr, S. M., Valdivieso, F., Castillo, C., Hjelle, B., Vial, P. Highly differentiated, resting gn-specific memory CD8+ T cells persist years after infection by andes hantavirus. PLoS Pathog. 6, e1000779-e1000779 (2010).
- Ndongala, M. L., Kamya, P., Boulet, S., Peretz, Y., Rouleau, D., Tremblay, C., Leblanc, R., Côté, P., Baril, J. G., Thomas, R., Vézina, S., Boulassel, M. R., Routy, J. P., Sékaly, R. P., Bernard, N. F. Changes in function of HIV-specific T-cell responses with increasing time from infection. Viral Immunol. 2, 159-168 (2010).
