Фермент связанных Immunospot анализ (ELISPOT): Количественная оценка Th-1 клеточного иммунного ответа против микробных антигенов
Summary
Идентификация микробного целей адаптивного иммунитета при идиопатической болезни может быть достигнуто путем использования фермента связаны immunospot анализа.
Abstract
Адаптивный иммунитет является важным компонентом для оформления внутриклеточных возбудителей. Способность обнаруживать и количественно эти реакции в организме человека является важным диагностическим инструментом. Фермент-связанного immunospot анализа (ELISPOT) приобретает все большую популярность благодаря своей способности идентифицировать клеточные реакции иммунитета против микробных антигенов, в том числе иммунитетом населения, таких как люди с ВИЧ инфекцией, трансплантации и использования стероидов. Этот анализ имеет возможность количественно иммунного ответа против антигенов микробов, а также отличить, если эти ответы Th1 или Th2 характер. ELISPOT не ограничивается месте воспаления. Он является универсальным в своей способности оценить для иммунных реакций в периферической крови, а также сайты активного участия таких как бронхоальвеолярного лаважа, спинно-мозговой жидкости, а также асцит. Обнаружение иммунных реакций против одного или нескольких антигенов возможно, а также конкретных эпитопов в микробных белков. Этот анализ облегчает обнаружение иммунных реакций с течением времени, а также различия в антигенов признан клетках-хозяевах T. Двойной анализов ELISPOT цвета доступны для обнаружения одновременного выражения двух цитокинов. Последние заявки на эту технику включать диагностику внелегочного туберкулеза, а также исследования вклада инфекционных антигенов к аутоиммунным заболеваниям.
Protocol
Discussion
Анализ ELISPOT стала одним из наиболее важных и широко используемых тестов для контроля иммунного ответа в организме человека и множество других видов. При анализе ELISPOT, иммунная клетка частот могут быть измерены на одном уровне клетки без расширения или манипуляции клеточных популяций. E…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
При частичной поддержке гранта Вандербильта CTSA 1 UL1 RR024975 из Национального центра по ресурсам исследований Национального института здоровья. Эта работа финансировалась НИЗ R01 HL 83839; R01 А. И. 65744.
Materials
A. Preparation of Media
B. Preparation of Tris Buffer
- Add 800 ml of ddH2O to 1 L beaker.
- Measure 12 grams of Tris and add to the beaker.
- Add 0.12 grams of magnesium chloride hexahydrate (MgCl2:6H2O) into the beaker.
- Stir with magnetic stirring rod on automatic stirring plate.
- Once dissolved, pH the solution to 9.5.
- Add 200 mL of ddH2O to the beaker, bringing it up to 1000mL.
- Filter the solution with a 0.22 μm filter.
C. Materials necessary for ELISPOT analysis:
References
- Dosanjh, D. P., Hinks, T. S., Innes, J. A., Deeks, J. J., Pasvol, G., Hackforth, S., Varia, H., Millington, K. A., Gunatheesan, R., Guyot-Revol, V., Lalvani, A. Improved diagnostic evaluation of suspected tuberculosis. Ann Intern Med. 148, 325-336 (2008).
- Sung, H. K. E. Diagnosis of abdominal tuberculosis by T-cell based assays on peripheral blood and peritoneal fluid mononuclear cells. Journal of Infection. 59, 409-415 (2009).
- Kim, S. -. H. Diagnosis of Central Nervous System Tuberculosis by T-Cell-Based Assays on Peripheral Blood and Cerebrospinal Fluid Mononuclear Cells. Clinical and Vaccine Immunology. , 1356-1362 (2008).
- Drake, W. P., Dhason, M. S., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Vadivelu, S., Hajizadeh, R., Newman, L. S., Kalams, S. A. Cellular recognition of Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 and KatG peptides in systemic sarcoidosis. Infect Immun. 75, 527-530 (2007).
- Allen, S. S., Evans, W., Carlisle, J., Hajizadeh, R., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Pride, D. T., Johnson, J. E., Drake, W. P. Superoxide dismutase A antigens derived from molecular analysis of sarcoidosis granulomas elicit systemic Th-1 immune responses. Respir Res. 25, 36-36 (2008).
- Mutsvangwa, J., Millington, K. A., Chaka, K., Mavhudzi, T., Cheung, Y. B., Mason, P. R., Butterworth, A. E., Corbett, E. L., Lalvani, A. Identifying recent Mycobacterium tuberculosis transmission in the setting of high HIV and TB burden. Thorax. 65, 315-320 (2010).
- Streeck, H., Frahm, N., Walker, B. D. The role of IFN-gamma Elispot assay in HIV vaccine research. Nat Protoc. 4, 461-469 (2009).
- Chaudhary, N., Staab, J. F., Marr, K. A. Healthy human T-Cell Responses to Aspergillus fumigatus antigens. PLoS One. 5, e9036-e9036 (2010).
- Manigold, T., Mori, A., Graumann, R., Llop, E., Simon, V., Ferr, S. M., Valdivieso, F., Castillo, C., Hjelle, B., Vial, P. Highly differentiated, resting gn-specific memory CD8+ T cells persist years after infection by andes hantavirus. PLoS Pathog. 6, e1000779-e1000779 (2010).
- Ndongala, M. L., Kamya, P., Boulet, S., Peretz, Y., Rouleau, D., Tremblay, C., Leblanc, R., Côté, P., Baril, J. G., Thomas, R., Vézina, S., Boulassel, M. R., Routy, J. P., Sékaly, R. P., Bernard, N. F. Changes in function of HIV-specific T-cell responses with increasing time from infection. Viral Immunol. 2, 159-168 (2010).
