ELISA immunospot (ELISPOT): Quantification des Th-1 réponses immunitaires cellulaires contre des antigènes microbiens
Summary
Identification de cibles microbiennes de l'immunité adaptative dans les maladies idiopathiques qui peut être accompli par l'utilisation du dosage immuno-enzymatique.
Abstract
L'immunité adaptative est une composante importante à la clairance des pathogènes intracellulaires. La capacité de détecter et de quantifier ces réponses chez les humains est un outil important de diagnostic. L'épreuve immuno-enzymatique immunospot (ELISPOT) gagne en popularité pour sa capacité à identifier les réponses immunitaires cellulaires contre les antigènes microbiens, y compris les populations immunodéprimées comme les personnes ayant une infection à VIH, transplantation, et l'utilisation de stéroïdes. Ce test a la capacité de quantifier les réponses immunitaires contre les antigènes microbiens spécifiques, ainsi que la distinction si ces réponses sont Th1 ou Th2 dans le caractère. ELISPOT n'est pas limité au site de l'inflammation. Il est polyvalent dans sa capacité à évaluer les réponses immunitaires au sein du sang périphérique, ainsi que les sites de la participation active tels que lavage broncho-alvéolaire, liquide céphalo-rachidien, et une ascite. Détection des réponses immunitaires contre un seul ou plusieurs antigènes est possible, ainsi que des épitopes spécifiques dans les protéines microbiennes. Ce test facilite la détection des réponses immunitaires au cours du temps, ainsi que des distinctions dans les antigènes reconnus par des lymphocytes T hôte. Double tests ELISPOT couleurs sont disponibles pour la détection de l'expression simultanée de deux cytokines. Les applications récentes de cette technique comprennent le diagnostic de tuberculose extrapulmonaire, ainsi que des enquêtes de la contribution des antigènes maladies infectieuses aux maladies auto-immunes.
Protocol
Discussion
Le test ELISPOT a émergé comme l'un des essais les plus importants et largement utilisé pour surveiller la réponse immunitaire chez les humains et une variété d'autres espèces. Avec le test ELISPOT, les fréquences des cellules immunitaires peuvent être mesurés au niveau de la cellule unique sans expansion ou la manipulation des populations de cellules. Test ELISPOT a été largement appliqué pour étudier les réponses immunitaires spécifiques d'antigènes dans diverses maladies, y compris les in…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Soutenu en partie par Vanderbilt CSTC subvention de 1 UL1 RR024975 du National Center for Research Resources des National Institutes of Health. Ce travail a été financé par le NIH R01 HL 83839; R01 IA 65744.
Materials
A. Preparation of Media
B. Preparation of Tris Buffer
- Add 800 ml of ddH2O to 1 L beaker.
- Measure 12 grams of Tris and add to the beaker.
- Add 0.12 grams of magnesium chloride hexahydrate (MgCl2:6H2O) into the beaker.
- Stir with magnetic stirring rod on automatic stirring plate.
- Once dissolved, pH the solution to 9.5.
- Add 200 mL of ddH2O to the beaker, bringing it up to 1000mL.
- Filter the solution with a 0.22 μm filter.
C. Materials necessary for ELISPOT analysis:
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