에서 기본 셀 문화 Drosophila Gastrula의 태아
Summary
우리는에서 dissociated 기본 세포를 준비 상세한 프로토콜을 제공합니다<em> Drosophil</em> 배아. 다른 분자 생화학 및 세포 이미징 방법과 함께, 효과적인 RNAi의 섭동을 수행하는 능력은 질문 다양한에서 해결될 수 있도록<em> Drosophila</em> 기본 세포.
Abstract
여기 Drosophila gastrula의 배아에서 dissociated을 준비하고 culturing 기본 세포에 대한 방법을 설명합니다. 간단한에서는 많은 양의 젊고 건강한 파리에서 배아를 개최는 수집 소독 및 유리 균질 화기를 사용하여 단일 세포 현탁액에 다음 물리적 dissociated 있습니다. 문화 매체에 적절한 밀도에 문화 접시 또는 챔버 슬라이드에 도금 후,이 세포가 추가로 특정 세포 마커에 의해 확인할 수 있습니다 몇 가지 morphologically – 서로 다른 세포 유형으로 구별하실 수 있습니다. 또한, 우리는 유전자 최저를 이끌어내는 두 번 좌초 (DS) RNAS 이러한 세포를 치료에 대한 조건을 제시한다. Drosophila 차 전지의 효율적인 RNAi는 dsRNA 간단하게 함유 배지에서 세포를 입욕에 의해 수행됩니다. 다른 분자, 생화학, 세포 이미징 분석과 함께 효과적인 RNAi의 섭동을 수행하는 능력은 질문의 다양한 특히 Drosophila 차 전지, 차별화된 근육 세포의 연결에 관련된 사람에 답변 수 있습니다.
Protocol
Discussion
Drosophila 세포의 주요 문화의 발달 패턴은 크게 기본 셀 준비 과정에서 여러 변수에 따라 가능 다를 수 있습니다. 우선, 달걀 부설에 사용되는 파리 젊은이가 (이전 일주일 이내)과 건강 (바이러스 또는 세균 감염은 무료). 있어야 그들이 쓸모 있고 그 배아에서 추출한 세포가 구별 수없는 오직 1~2일 위해 살아남을 것이다로 Unfertilized 또는 감염된 태아는 피해야한다. 둘째, 균질화 과정에서, ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
JB는 데몬 런연 암 연구 재단 원정대 DRG – 1716-02에 의해 지원되었다. 점프 온 제로는 NIH / NIGMS 원정대 F32 GM082174 – 02에 의해 지원되었다. NP는 하워드 휴즈 의학 연구소의 수사관이다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Shields and Sang M3 medium | Sigma | S3652 | ||
| Fetal bovine serum | JRH Biosciences | 12103-500M | ||
| Insulin from bovine pancreas | Sigma | I-6634 | ||
| Large embryo collection cages | Genesee Scientific | 59-101 | ||
| #25 US standard testing sieve | VWR | 57334-454 | ||
| #45 US standard testing sieve | VWR | 57334-462 | ||
| #120 US standard testing sieve | VWR | 57334-474 | ||
| Dounce tissue grinder, Wheaton 7 mL | VWR | 62400-620 | ||
| Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL | VWR | KT885300-0040 | ||
| Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL | VWR | KT885300-0100 | ||
| Costar, 384-well plate | VWR | 29444-078 | ||
| Lab-Tek II Chambered coverglass | Fisher Scientific | 171080 |
References
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