Summary

Подготовка Мышь гипофиза Иммуноген для индукции экспериментального аутоиммунного гипофизит

Published: December 17, 2010
doi:

Summary

Аутоиммунные гипофизит могут быть воспроизведены у мышей путем введения экстракта мыши белки гипофиза.

Abstract

Аутоиммунные гипофизит является хроническое воспаление гипофиза причиной или сопровождаться аутоиммунных 1. Он традиционно считается редким заболеванием, но отчетность заметно возросла в последние годы. Гипофизит, по сути, развивается не редкость, как "побочный эффект" у онкологических пациентов, получавших антитела, которые блокируют рецепторы тормозных экспрессируется на Т-лимфоциты, таких как CTLA-4 2 и PD-1 рецепторов. Аутоиммунные гипофизит могут быть вызваны экспериментальным путем введения мышам с гипофизом белки смешать с адъювантной 3. В этом видео статье мы покажем, как извлекать белки из мыши гипофиза и как подготовить их в форму, пригодную для индуцирования аутоиммунных гипофизит в SJL мышей.

Protocol

Экспериментальный протокол Первым шагом в этом протоколе исследования является сбор большого количества мыши желез гипофиза. Второй шаг заключается в гомогенизации желез подготовить белков экстракта. Третий шаг состоит в эмульсию этих белков с жирной смесью. <p class="jov…

Discussion

Несмотря на то что первый пациент с аутоиммунными гипофизит сообщалось, в 1962 году 4, патогенных гипофиза аутоантигенов еще предстоит идентифицировать 5. Экспериментальные модели на животных могут быть очень полезны в выявлении таких аутоантигенов, содействие открытию биом…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа была поддержана NIH грант DK080351 к ПК.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
15-ml Falcon tubes        
homogenization buffer        
phosphate buffered saline        
protease inhibitor cocktail        
Polytron homogenizer        
BCA assay   Pierce 23225  
Complete Freund’s Adjuvant (CFA)   Sigma F-5881  
Mycobacterium tuberculosis   Becton Dickinson 231141  
2.5 mL Hamilton gastight syringe        
22-gauge micro-emulsifying needle        

References

  1. Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. . Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).
  2. Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer. J Immunother. 28, 593-598 (2005).
  3. Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model. Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).
  4. Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. Anterior hypophysitis and Hashimoto’s disease in a woman. J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).
  5. Caturegli, P. Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s). J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).

Play Video

Cite This Article
Tzou, S., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis. J. Vis. Exp. (46), e2181, doi:10.3791/2181 (2010).

View Video