Summary

הכנת Immunogen עכבר יותרת המוח עבור אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימונית ניסויית

Published: December 17, 2010
doi:

Summary

Hypophysitis אוטואימוניות ניתן לשחזר בעכברים באמצעות הזרקת תמצית של חלבונים עכבר יותרת המוח.

Abstract

Hypophysitis אוטואימונית היא דלקת כרונית של בלוטת יותרת המוח הנגרמת או מלווה אוטואימוניות 1. זה באופן מסורתי נחשב מחלה נדירה אך דיווח גדל במידה ניכרת בשנים האחרונות. Hypophysitis, למעשה, מפתחת לא יוצאת דופן כמו "תופעת לוואי" אצל חולי סרטן שטופלו עם נוגדנים החוסמים קולטנים מעכבות הביע על לימפוציטים מסוג T, כגון CTLA-4 2 ו PD-1 קולטנים. Hypophysitis אוטואימונית יכול להיגרם על ידי הזרקת בניסוי בעכברים עם חלבונים יותרת המוח מעורב עם 3 adjuvant. במאמר זה וידאו אנחנו מדגימים כיצד לחלץ חלבונים מן העכבר בלוטות יותרת המוח ואיך להכין אותם בצורה מתאימה גרימת hypophysitis אוטואימוניות בעכברים SJL.

Protocol

ניסיוני פרוטוקול הצעד הראשון פרוטוקול הניסוי הזה היא לאסוף מספר גדול של בלוטות יותרת המוח העכבר. הצעד השני הוא homogenize בלוטות להכין תמצית חלבון. הצעד השלישי הוא emulsify החלבונים האלה בתערובת שמנוני. <p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"…

Discussion

למרות העובדה כי החולה הראשון עם hypophysitis אוטואימוניות דווחה בשנת 1962 4, autoantigens פתוגניים יותרת המוח נשארים להיות מזוהה 5. במודלים של בעלי חיים יכול להיות מאוד שימושי כדי לזהות אלה autoantigens, בסיוע גילוי סמנים כי הם לתרגום על הטיפול בחולה. מאמר זה הוכיח הליך פשוט ל?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענק DK080351 למחשב.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
15-ml Falcon tubes        
homogenization buffer        
phosphate buffered saline        
protease inhibitor cocktail        
Polytron homogenizer        
BCA assay   Pierce 23225  
Complete Freund’s Adjuvant (CFA)   Sigma F-5881  
Mycobacterium tuberculosis   Becton Dickinson 231141  
2.5 mL Hamilton gastight syringe        
22-gauge micro-emulsifying needle        

References

  1. Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. . Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).
  2. Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer. J Immunother. 28, 593-598 (2005).
  3. Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model. Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).
  4. Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. Anterior hypophysitis and Hashimoto’s disease in a woman. J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).
  5. Caturegli, P. Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s). J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).

Play Video

Cite This Article
Tzou, S., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis. J. Vis. Exp. (46), e2181, doi:10.3791/2181 (2010).

View Video