Summary

Vorbereitung der Maus Pituitary Immunogen für die Induktion der experimentellen autoimmunen Hypophysitis

Published: December 17, 2010
doi:

Summary

Autoimmune Hypophysitis kann in Mäusen durch Injektion ein Auszug aus Maus Hypophyse Proteine ​​reproduziert werden.

Abstract

Autoimmune Hypophysitis ist eine chronische Entzündung der Hypophyse verursacht oder begleitet von Autoimmunität 1. Es ist traditionell eine seltene Erkrankung, aber die Berichterstattung hat sich in den letzten Jahren zugenommen. Hypophysitis in der Tat entwickelt sich nicht selten als "Nebenwirkung" bei Krebspatienten mit Antikörpern, die hemmenden Rezeptoren auf T-Lymphozyten, wie CTLA-4 2 und PD-1-Rezeptoren exprimiert Block behandelt. Autoimmune Hypophysitis kann experimentell durch die Injektion von Mäusen mit Hypophysen-Proteine ​​mit einem Adjuvans 3 gemischte induziert werden. In diesem Video-Artikel werden wir zeigen, wie Proteine ​​aus Maus Hypophyse und wie man sie in eine geeignete Form für die Induktion autoimmune Hypophysitis in SJL Mäusen vorbereiten zu extrahieren.

Protocol

Experimentelles Protokoll Der erste Schritt in diese experimentelle Protokoll ist eine große Anzahl von Maus-Hypophyse zu sammeln. Der zweite Schritt ist, um die Drüsen zu homogenisieren, um ein Protein Extrakt herzustellen. Der dritte Schritt besteht darin, diese Proteine ​​mit einer öligen Mischung zu emulgieren. Schritt 1: Sammlung und Lagerung von Maus Hypophyse Die Maus Hypophyse sitzt an der Basis des Schädels in einer Verti…

Discussion

Trotz der Tatsache, dass der erste Patient mit Autoimmun-Hypophysitis in 1962 4 wurde berichtet, bleiben die pathogenen Hypophyse Autoantigene identifiziert 5 sein. Tiermodelle können sehr nützlich sein, um diese Autoantigene zu identifizieren, Beihilfe zur Entdeckung von Biomarkern, die übersetzbar Patientenversorgung leisten. Dieser Artikel hat eine einfache Verfahrensweise zur Herstellung von Hypophysen-Proteine ​​in einer Form, die geeignet für Induktion autoimmune Hypophysitis bei Vers…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Diese Arbeit wurde vom NIH DK080351 zu PC unterstützt.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
15-ml Falcon tubes        
homogenization buffer        
phosphate buffered saline        
protease inhibitor cocktail        
Polytron homogenizer        
BCA assay   Pierce 23225  
Complete Freund’s Adjuvant (CFA)   Sigma F-5881  
Mycobacterium tuberculosis   Becton Dickinson 231141  
2.5 mL Hamilton gastight syringe        
22-gauge micro-emulsifying needle        

References

  1. Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. . Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).
  2. Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer. J Immunother. 28, 593-598 (2005).
  3. Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model. Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).
  4. Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. Anterior hypophysitis and Hashimoto’s disease in a woman. J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).
  5. Caturegli, P. Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s). J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).

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Cite This Article
Tzou, S., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis. J. Vis. Exp. (46), e2181, doi:10.3791/2181 (2010).

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