Summary

Preparação de rato Imunogénio Pituitária para a indução de hipofisite Auto-Imune Experimental

Published: December 17, 2010
doi:

Summary

Hipofisite auto-imune pode ser reproduzido em ratos através da injeção de um extrato de proteínas do mouse pituitária.

Abstract

Hipofisite auto-imune é uma inflamação crônica da glândula pituitária causada ou acompanhada de auto-imunidade 1. Ela tem sido tradicionalmente considerada uma doença rara, mas relatórios tem aumentado significativamente nos últimos anos. Hipofisite, de fato, não raro se desenvolve como um "efeito colateral" em pacientes com câncer tratados com anticorpos que bloqueiam os receptores inibitórios expressa nos linfócitos T, como CTLA-4 2 e PD-1 receptores. Hipofisite auto-imune pode ser induzida experimentalmente pela injeção de ratos com proteínas pituitária misturado com um 3 adjuvante. Neste artigo de vídeo demonstramos como extrair proteínas de rato pituitária glândulas e como prepará-los de forma adequada para induzir hipofisite auto-imunes em camundongos SJL.

Protocol

Protocolo Experimental O primeiro passo neste protocolo experimental é coletar um grande número de glândulas pituitária de rato. O segundo passo é homogeneizar as glândulas para preparar um extrato de proteína. A terceira etapa é para emulsionar estas proteínas com uma mistura de hidrocarbonetos. Passo 1: Recolha e armazenamento das glândulas pituitária de rato A glândula pituitária do mouse fica na base do crânio em uma dep…

Discussion

Apesar do fato de que o primeiro paciente com hipofisite auto-imune foi relatada em 1962 4, a auto-antígenos patogênicos pituitária continuam a ser identificados 5. Modelos animais podem ser muito úteis para identificar esses auto-antígenos, auxiliando na descoberta de biomarcadores que são traduzíveis para o atendimento ao paciente. Este artigo tem demonstrado um procedimento simples para preparação de proteínas pituitária de uma forma que é adequada para induzir hipofisite auto-imunes…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabalho foi financiado pelo NIH conceder DK080351 para PC.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
15-ml Falcon tubes        
homogenization buffer        
phosphate buffered saline        
protease inhibitor cocktail        
Polytron homogenizer        
BCA assay   Pierce 23225  
Complete Freund’s Adjuvant (CFA)   Sigma F-5881  
Mycobacterium tuberculosis   Becton Dickinson 231141  
2.5 mL Hamilton gastight syringe        
22-gauge micro-emulsifying needle        

References

  1. Caturegli, P., Newschaffer, C., Olivi, A., Pomper, M. G., Burger, P. C., Rose, N. R. . Autoimmune Hypophysitis Endocr Rev. 26, 599-614 (2005).
  2. Blansfield, J. A., Beck, K. E., Tran, K., Yang, J. C., Hughes, M. S., Kammula, U. S., Royal, R. E., Topalian, S. L., Haworth, L. R., Levy, C., Rosenberg, S. A., Sherry, R. M. Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 blockage can induce autoimmune hypophysitis in patients with metastatic melanoma and renal cancer. J Immunother. 28, 593-598 (2005).
  3. Tzou, S. C., Lupi, I., Landek, M., Gutenberg, A., Tzou, Y. M., Kimura, H., Pinna, G., Rose, N. R., Caturegli, P. Autoimmune Hypophysitis of SJL mice: Clinical Insights from a New Animal Model. Endocrinology. 149, 3461-3469 (2008).
  4. Goudie, R. B., Pinkerton, P. H. Anterior hypophysitis and Hashimoto’s disease in a woman. J Pathol Bacteriol. 83, 584-585 (1962).
  5. Caturegli, P. Autoimmune hypophysitis: an underestimated disease in search of its autoantigen(s). J Clin Endocrinol Metab. 92, 2038-2040 (2007).

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Cite This Article
Tzou, S., Landek-Salgado, M. A., Kimura, H., Caturegli, P. Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis. J. Vis. Exp. (46), e2181, doi:10.3791/2181 (2010).

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