Los mosquitos Anopheles stephensi son vectores de la malaria que habitan en la India y en toda Asia. Este video muestra la técnica para la realización de micro-inyecciones de esta especie con transgenes que confieren resistencia a la malaria a los mosquitos. Gran parte de la metodología se demuestra en este vídeo es aplicable a las técnicas de microinyección de otras especies de mosquitos.
Abstract
La introducción de genes exógenos en los genomas de los mosquitos requiere técnicas de microinyección adaptados a las especies de interés. Este protocolo de vídeo se muestra un método utilizado por el laboratorio de James microinject construcciones de ADN en embriones Anopheles stephensi para la generación de mosquitos transformado. Técnicas para la preparación de las agujas de microinyección, recolección y preparación de los embriones y la realización de la microinyección se ilustran.
Protocol
Preparación antes de la microinyección: Los mosquitos la sangre de alimentación: para la inyección de lunes a miércoles en hembras se alimentan del viernes anterior. Para inyectar el jueves y viernes, las hembras se alimentan de lunes de la misma semana. Prepare las agujas de cuarzo, utilizando el programa 2 y tampón isotónico (ver Materiales). "Colocación de tubo" de los embriones es la normal vial Drosophila cultura. Algodón húmedo en la parte …
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Injection Quartz needles
Sutter Instrument
O.D.- 1.0 mm, I.D.-0.70, 10 cm length, are prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 mm micropipette puller.
Terenius, O., Juhn, J., James, A. A. Injection of An. stephensi Embryos to Generate Malaria-resistant Mosquitoes. J. Vis. Exp. (5), e216, doi:10.3791/216 (2007).