Zanzare anofele stephensi sono vettori per la malaria che abitano l'India e tutta l'Asia. Questo video mostra la tecnica per l'esecuzione di microiniezioni di questa specie con transgeni che conferiscono resistenza alla malaria alla zanzara. Gran parte della metodologia ha dimostrato in questo video è applicabile alle tecniche di microiniezione di altre specie di zanzare.
Abstract
L'introduzione di geni esogeni nel genoma delle zanzare richiede tecniche di microiniezione su misura per le specie di interesse specifico. Questo protocollo video dimostra un metodo utilizzato dal laboratorio di James a microinject costrutti di DNA in embrioni Anopheles stephensi per la generazione di zanzare trasformato. Tecniche di preparazione aghi microiniezione, la raccolta e la preparazione degli embrioni e l'esecuzione della microiniezione sono illustrati.
Protocol
Preparazione in anticipo di microiniezione: Zanzare alimentazione del sangue: per iniezione da Lunedi a alimentare femmine Mercoledì sul precedente Venerdì. Per iniettare Giovedi e Venerdì, le femmine si nutrono di Lunedi della stessa settimana. Preparare gli aghi quarzo utilizzando il programma 2 e tampone isotonica (vedi Materiali). "Posa tubo" per gli embrioni è la regolare fiala cultura Drosophila. Cotone idrofilo bagnato in fondo, con un disco di …
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Injection Quartz needles
Sutter Instrument
O.D.- 1.0 mm, I.D.-0.70, 10 cm length, are prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 mm micropipette puller.
Terenius, O., Juhn, J., James, A. A. Injection of An. stephensi Embryos to Generate Malaria-resistant Mosquitoes. J. Vis. Exp. (5), e216, doi:10.3791/216 (2007).