Microinjección de células enfermeras de Drosophila: Un método de parto intracelular

Abstract

Fuente: Catrina, I. E., et al. Visualización y seguimiento de mRNAs endógenos en cámaras de huevos Drosophila melanogaster en vivo. J. Vis. (2019).

Debido a su gran tamaño y organización relativamente simple, las células enfermeras de Drosophila son ideales para estudios de imágenes de células vivas. Este video describe un método de microinjección para la entrega de compuestos exógenos en las células, y el protocolo destacado demuestra el procedimiento con sondas de oligonucleótidos fluorescentes llamadas balizas moleculares (MBs) utilizadas para visualizar transcripciones endógenas de ARNm.

Protocol

Este protocolo se extrae de Catrina et al., Visualizando y rastreando mRNAs endógenas en cámaras de huevos Drosophila melanogaster en vivo, J. Vis. Exp. (2019). 1. Diseño de MBs para imágenes de células en vivo Doble la secuencia de ARN de destino para predecir la estructura secundaria del objetivo de ARNm utilizando el “formulario de ARN” del servidor mfold (<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form" target="_…

Materials

Spectrofluorometer	Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon	n/a	Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette	Fireflysci (former Precision Cells Inc.)	701MFL
Dumont #5 tweezer	World Precision Instruments	501985	Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700	Sigma-Aldrich	H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm	VWR	48393-048
Dissecting microscope	Leica MZ6 Leica Microsystems Inc.	n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad	Genesee Scienific	59-114
Tris-HCL pH 7.5	Sigma-Aldrich	1185-53-1
Magnesium chloride	Sigma-Aldrich	7791-18-6
NaCl	Sigma-Aldrich	7647-14-5
Spinning disc confocal microscope	Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc.	n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera	Hamamatsu	n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator	Eppendorf Inc.	920000037
FemtoJet Microinjector	Eppendorf Inc.	920010504
Injection needle: Femtotips II	Eppendorf Inc.	930000043
Loading tip: 20 μL Microloader	Eppendorf Inc.	930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm	VWR	48393-026; 48393-172
Dry yeast	Any grocery store	n/a
Computer, > 20 GB RAM			Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing