ショウジョウバエナース細胞の微小注射:細胞内送達法

Abstract

出典: Catrina, I. E., 他. ライブ ショウジョウバエメラノガスター 卵室で内因性の mRNA を視覚化し、追跡. J. ヴィス・エクス (2019).

その大きなサイズと比較的単純な組織のために、 ショウジョウバエ の看護師細胞は、生細胞イメージング研究に理想的に適しています。このビデオでは、外因性化合物を細胞に送達するためのマイクロインジェクション法について説明し、注目のプロトコルは、内因性mRNA転写物を視覚化するために使用される分子ビーコン(MB)と呼ばれる蛍光オリゴヌクレオチドプローブによる手順を示しています。

Protocol

このプロトコルは、Catrinaらから抜粋され、生のショウジョウバエメラノガスター卵室、J.Vis. Expの内因性mRNAを視覚化および追跡する。(2019). 1. ライブセルイメージング用のMBの設計 標的RNA配列を折り畳んで、mfoldサーバからの「RNA形態」を用いてmRNA標的の二次構造を予測する<a href="http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form" target="_…

Materials

Spectrofluorometer	Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon	n/a	Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette	Fireflysci (former Precision Cells Inc.)	701MFL
Dumont #5 tweezer	World Precision Instruments	501985	Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700	Sigma-Aldrich	H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm	VWR	48393-048
Dissecting microscope	Leica MZ6 Leica Microsystems Inc.	n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad	Genesee Scienific	59-114
Tris-HCL pH 7.5	Sigma-Aldrich	1185-53-1
Magnesium chloride	Sigma-Aldrich	7791-18-6
NaCl	Sigma-Aldrich	7647-14-5
Spinning disc confocal microscope	Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc.	n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera	Hamamatsu	n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator	Eppendorf Inc.	920000037
FemtoJet Microinjector	Eppendorf Inc.	920010504
Injection needle: Femtotips II	Eppendorf Inc.	930000043
Loading tip: 20 μL Microloader	Eppendorf Inc.	930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm	VWR	48393-026; 48393-172
Dry yeast	Any grocery store	n/a
Computer, > 20 GB RAM			Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing