그들의 큰 규모 및 상대적으로 간단한 조직 때문에, Drosophila 간호원 세포는 살아있는 세포 화상 진찰 연구 결과에 이상적으로 적합합니다. 이 비디오는 세포로 전달되는 외인성 화합물에 대한 미세 주입 방법을 설명하고, 특징적인 프로토콜은 내인성 mRNA 전사체를 시각화하는 데 사용되는 분자 비콘(MBs)에게 불린 형광 올리고뉴클레오티드 프로브를 가진 절차를 보여줍니다.
Protocol
이 프로토콜은 Catrina 외에서발췌, 시각화 및 라이브 Drosophila 멜라노가스터 계란 챔버에서 내생 mRNAs를 추적, J. Vis. Exp. (2019). 1. 라이브 세포 이미징을 위한 MB 설계 표적 RNA 서열을 접어 mfold 서버(http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form)로부터”RNA 형태”를 사용하여 mRNA ?…
Materials
Spectrofluorometer
Fluoromax-4 Horiba-Jobin Yvon
n/a
Photon counting spectrofluorometer
Quartz cuvette
Fireflysci (former Precision Cells Inc.)
701MFL
Dumont #5 tweezer
World Precision Instruments
501985
Thin tweezers are very important to separate out the individual egg chambers
Halocarbon oil 700
Sigma-Aldrich
H8898
Cover slip No.1 22 mm x 40 mm
VWR
48393-048
Dissecting microscope
Leica MZ6 Leica Microsystems Inc.
n/a
CO2 fruit fly anesthesia pad
Genesee Scienific
59-114
Tris-HCL pH 7.5
Sigma-Aldrich
1185-53-1
Magnesium chloride
Sigma-Aldrich
7791-18-6
NaCl
Sigma-Aldrich
7647-14-5
Spinning disc confocal microscope
Leica DMI-4000B inverted microscope equipped with Yokogawa CSU 10 spinning disc Leica Microsystems Inc.
n/a
Hamamatsu C9100-13 ImagEM EMCCD camera
Hamamatsu
n/a
PatchMan NP 2 Micromanipulator
Eppendorf Inc.
920000037
FemtoJet Microinjector
Eppendorf Inc.
920010504
Injection needle: Femtotips II
Eppendorf Inc.
930000043
Loading tip: 20 μL Microloader
Eppendorf Inc.
930001007
Micro Cover glasses no. 1 or 1.5, 22 mm x 40 mm
VWR
48393-026; 48393-172
Dry yeast
Any grocery store
n/a
Computer, > 20 GB RAM
Although processing can be carried out on most computers, higher capabilities will increase the speed of the processing