Dieses Protokoll zeigt die Technik zur Gewinnung von Eizellen oder Early-Stage-befruchteten Embryonen aus dem Eileiter von Mäusen. Die Fähigkeit, die infindibulum identifizieren und legen Sie eine stumpfe Ende Nadel in ist es wichtig, richtig Durchführung des Verfahrens.
Abstract
Bis heute haben nur wenige Studien, erfolgreiche Manipulationen Peromyscus Embryogenese oder Reproduktionsbiologie berichtet. Zusammen mit dem Peromyscus Genetic Stock Center (http://stkctr.biol.sc.edu), sind wir die Charakterisierung der markanten Unterschiede notwendig, um dieses System zu entwickeln. Ein primäres Ziel war es, Eizellen / frühen Embryo Abruf zu optimieren.
Protocol
Embryo / Eizellen Mindestens zwei Stunden vor dem Abruf von Embryonen / Eizellen, KSOM ist in der 37 º C CO 2-Inkubator und FHM platziert werden müssen von -20 ° aufgetaut werden. Eine Glasschale mit drei konkave seichten Brunnen ist zu Haus Tropfen KSOM im Inkubator verwendet. Um zu verhindern, Dehydrierung, sind die KSOM und Geschirrtücher in einen Behälter mit Deckel, dass Wasser an der Unterseite angebracht. Dieses Gerät verhindert die Verdunstung ohne den Einsatz von Mineralöl. <b…
Discussion
In diesem Artikel zeigen wir, das Abrufen von Oozyten aus dem Eisprung-induzierte (superovulierten) Peromyscus. Die Verwendung von Superovulation (im Gegensatz zu natürlichen Zyklusstand Gegensatz) ist üblich aufgrund der viel größeren resultierenden Zahlen. Allerdings ist Vorsicht geboten bei der Interpretation von Ergebnissen Verwendung solcher Eizellen / Embryonen, da sowohl die Hormone verwendet, um den Eisprung und Kultivierung induziert Auswirkungen haben können, berücksichtigt werden.
Wenn estrous bestätigt wurde, sind…
Acknowledgements
Ich möchte Mike Dewey vom Peromyscus Genetic Stock Center herzlich für seine Hilfe, Geduld und Wissen.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Flushing needle
Tool
Zephyrtronics
ZT5-130-L
30 gauge blunt
Forceps (2)
Tool
Roboz
RS-5060
Peromyscus
Animal
Peromyscus Genetic Stock Center
Scissors
Tool
Roboz
RS-5880
FHM HEPES Buffered Media
Reagent
Specialty Media
MR-025-d
KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml)
Reagent
Specialty Media
MR-020P-5F
Mouth Pipette
Tool
Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing