Dit protocol laat de techniek voor de extractie van eicellen of een vroeg stadium bevrucht embryo uit de eileider van muizen. De mogelijkheid om de infindibulum identificeren en steek een stomp uiteinde naald in is het essentieel om de juiste uitvoering van de procedure.
Abstract
Tot op heden hebben slechts een paar studies met succes manipulaties van Peromyscus embryogenese of reproductieve biologie. Samen met de Peromyscus Genetische Stock Center (http://stkctr.biol.sc.edu), zijn wij het karakteriseren van de meest opvallende verschillen die nodig is om dit systeem te ontwikkelen. Een primaire doel is geweest om eicel / vroege embryo ophalen optimaliseren.
Protocol
Embryo / Ovumaspiratie Ten minste twee uur voor het ophalen van embryo's / eicellen, KSOM wordt geplaatst in de 37 º C CO 2 incubator en FHM moeten worden ontdooid van -20 °. Een glazen schaal met drie concave ondiepe putten wordt gebruikt naar het huis van druppels KSOM in de incubator. Om uitdroging te voorkomen, zijn de KSOM en schotel geplaatst in een container met deksel dat water is aan de onderkant. Dit apparaat voorkomt verdamping zonder het gebruik van minerale olie. </li…
Discussion
In dit artikel tonen we het ophalen van eicellen van ovulatie-geïnduceerde (gesuperovuleerde) Peromyscus. Het gebruik van superovulatie (in tegenstelling tot natuurlijke oestrische cyclus) is vaak te wijten aan de veel grotere aantallen als gevolg. Voorzichtigheid moet echter worden genomen bij het interpreteren van resultaten gebruik te maken van zulke eicellen / embryo's, omdat zowel de hormonen worden gebruikt om de ovulatie en het kweken induceren, kunnen effecten hebben.
Wanneer oestrische is bevestigd, zijn vrouwen euthen…
Acknowledgements
Ik wil Mike bedanken Dewey uit de Peromyscus Genetische Stock Center voor zijn hulp, geduld en kennis.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Flushing needle
Tool
Zephyrtronics
ZT5-130-L
30 gauge blunt
Forceps (2)
Tool
Roboz
RS-5060
Peromyscus
Animal
Peromyscus Genetic Stock Center
Scissors
Tool
Roboz
RS-5880
FHM HEPES Buffered Media
Reagent
Specialty Media
MR-025-d
KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml)
Reagent
Specialty Media
MR-020P-5F
Mouth Pipette
Tool
Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing