هذا البروتوكول يوضح تقنية لاستخراج البويضات أو الأجنة في مرحلة مبكرة من قناة البيض المخصب من الفئران. القدرة على تحديد infindibulum وادخال ابرة في نهاية حادة من الضروري القيام بشكل صحيح الإجراء.
Abstract
حتى الآن ، وأفادت دراسات قليلة فقط التلاعب الناجح للمرحلة التطور الجنيني Peromyscus أو البيولوجيا الإنجابية. جنبا إلى جنب مع الأسهم Peromyscus مركز الوراثية (http://stkctr.biol.sc.edu) ، ونحن تميز الاختلافات البارزة اللازمة لتطوير هذا النظام. وكان أحد الأهداف الرئيسية لتحسين البويضة / أوائل استرجاع الجنين.
Protocol
جنين / سيت استرجاعها يجب إذابة مدة ساعتين على الأقل قبل استرجاع الأجنة / البويضات ، يتم وضع KSOM في 37 درجة مئوية حاضنة 2 أكسيد الكربون وFHM من ° -20. ويستخدم الزجاج صحن يحتوي على ثلاثة آبار ضحلة مقعرة لقطرات منزل KSOM في ا?…
Discussion
في هذه المقالة ، ونحن لشرح استرجاع البويضات من الاباضة بفعل Peromyscus (superovulated). استخدام فرط الإباضة (على العكس من دورة دقي الطبيعي) هو شائع نظرا لأعداد أكبر بكثير الناتجة عن ذلك. ومع ذلك ، يجب اتخاذ الحذر في تفسير نتائج استخدام هذه البويضات / الأجنة ، كما كل من الهرمونات المستخدمة للح?…
Acknowledgements
وأود أن أشكر مايك ديوي من مركز ألبوم الوراثية Peromyscus على صبره والمساعدة والمعرفة.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Flushing needle
Tool
Zephyrtronics
ZT5-130-L
30 gauge blunt
Forceps (2)
Tool
Roboz
RS-5060
Peromyscus
Animal
Peromyscus Genetic Stock Center
Scissors
Tool
Roboz
RS-5880
FHM HEPES Buffered Media
Reagent
Specialty Media
MR-025-d
KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml)
Reagent
Specialty Media
MR-020P-5F
Mouth Pipette
Tool
Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing