Ce protocole illustre la technique d'extraction ou d'ovocytes à un stade précoce des embryons fertilisés de l'oviducte de la souris. La capacité à identifier les infindibulum et insérer une aiguille extrémité émoussée en elle est essentielle à l'exécution correcte de la procédure.
Abstract
À ce jour, seules quelques études ont rapporté des manipulations de succès de l'embryogenèse Peromyscus ou biologie reproductive. En collaboration avec le Centre de Peromyscus stock génétique (http://stkctr.biol.sc.edu), nous caractérisons les différences saillantes nécessaires pour développer ce système. Un premier objectif a été d'optimiser ovocyte / récupération précoce de l'embryon.
Protocol
Embryon / ovocytes de récupération Au moins deux heures avant le prélèvement des ovocytes / embryons, KSOM est placé dans les 37 º C incubateur à CO 2 et FHM doivent être décongelés à partir de -20 °. Un plat en verre contenant trois concaves puits peu profonds sont utilisés à des gouttes maison de KSOM dans l'incubateur. Pour prévenir la déshydratation, l'KSOM et le plat sont placés dans un conteneur à couvercle qui a l'eau au fond. Cet appareil empêche l'évapor…
Discussion
Dans cet article, nous démontrons la récupération d'ovocytes à partir de l'ovulation induite (superovulation) Peromyscus. L'utilisation de superovulation (par opposition à cycle œstral naturel) est commune en raison du nombre beaucoup plus important qui en résulte. Cependant, il faut être prudent dans l'interprétation des résultats en utilisant des ovocytes de telles / embryons, à la fois comme les hormones utilisées pour induire l'ovulation et la culture peuvent avoir des effets.
Lorsque œstral a é…
Acknowledgements
Je tiens à remercier Mike Dewey partir du Centre de stock génétique Peromyscus pour son aide, de patience et de connaissances.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Flushing needle
Tool
Zephyrtronics
ZT5-130-L
30 gauge blunt
Forceps (2)
Tool
Roboz
RS-5060
Peromyscus
Animal
Peromyscus Genetic Stock Center
Scissors
Tool
Roboz
RS-5880
FHM HEPES Buffered Media
Reagent
Specialty Media
MR-025-d
KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml)
Reagent
Specialty Media
MR-020P-5F
Mouth Pipette
Tool
Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing