A multi-paramétricos Islet Sistema Perifusion dentro de un dispositivo de microfluidos Perifusion
Summary
Un dispositivo de microfluidos perifusion islote fue desarrollado para la evaluación de la dinámica de la secreción de insulina de los islotes y varias imágenes simultáneas de fluorescencia de la entrada de calcio mitocondrial y los posibles cambios.
Abstract
Un dispositivo de microfluidos perifusion islote fue desarrollado para la evaluación de la dinámica de la secreción de insulina de los islotes y varias imágenes simultáneas de fluorescencia de la entrada de calcio mitocondrial y los posibles cambios. El dispositivo consta de tres capas: la primera capa contiene una matriz de micro pozos (500 m de diámetro y 150 m de profundidad) que ayudan a inmovilizar a los islotes durante la exposición al flujo y maximizar la superficie expuesta de los islotes, la segunda capa contiene una circular perifusion cámara (3 mm de profundidad, 7 mm de diámetro), y la tercera capa contiene un canal de entrada de mezcla que los aficionados a cabo antes de la inyección en la cámara de perifusion (2 mm de ancho, 19 mm de longitud y 500 m de altura) para la optimización de la eficiencia en la mezcla antes de entrar en la cámara de perifusion. La creación de los gradientes de la glucosa, asimismo, de una forma lineal, campana, y las formas cuadradas también se pueden crear en la red perifusion de microfluidos y se ha demostrado.
Protocol
Discussion
Los sistemas tradicionales de perifusion islote (macroescala y microescala) tienen algunas limitaciones, incluyendo complejos de configuración y diseño, altos requerimientos técnicos, y la dificultad para crear prescrito por el usuario gradientes químicos en el sistema. El sistema de microfluidos perifusion descrito aquí supera estas limitaciones con la simple geometría de diseño y fabricación. Más importante aún, este sistema puede ser integrado con el enfoque de imágenes de fluorescencia que proporcionan un…
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por AAUW internacional de becas para Adeola Adewola, NIH / CNRR (U42RR023245) a José Oberholzer, y el Proyecto de Diabetes de Chicago.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 60ml Syringes | BD | |||
| Fura-2 fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Rhodamine123 Fluorescence dye | Molecular Probes Inc. | |||
| Glucose | Sigma | |||
| Bovine Serum Albumin | Sigma | |||
| 30″ Silicone tubings | Cole Palmer | 1/16 x 1/8in | ||
| 1.5ml Eppendorf tubes | Fisher | |||
| Y-connectors | Cole Palmer | 1/16” & 4mm | ||
| Syringe connectors | Cole Palmer | female luer plug 1/16” | ||
| Straight connectors | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Elbow connector | Cole Palmer | 1/16” | ||
| Havard syringe pump | Harvard Apparatus | |||
| Perifusion device | ||||
| Hot plate | PMC | |||
| Thermometer | Omega Engineering Inc. | |||
| Fraction collector | Gibson | |||
| Pippettor | Fisher | |||
| Inverted epiflorescence microscope | Olympus | IX71 | ||
| Charge-coupled device | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
References
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
