Um dispositivo perifusion microfluídicos ilhota foi desenvolvido para a avaliação dinâmica da secreção de insulina de ilhotas múltiplo e imagens de fluorescência simultânea de influxo de cálcio e mitocondrial possíveis mudanças.
Abstract
Um dispositivo perifusion microfluídicos ilhota foi desenvolvido para a avaliação dinâmica da secreção de insulina de ilhotas múltiplo e imagens de fluorescência simultânea de influxo de cálcio e mitocondrial possíveis mudanças. O dispositivo consiste de três camadas: a primeira camada contém uma matriz de microescala poços (500 mm e diâmetro de 150 profundidade mm) que ajudam a imobilizar o ilhotas enquanto expostos a fluxo e maximizar a área de superfície exposta das ilhotas, a segunda camada contém uma circular perifusion câmara (3 mm de profundidade, 7 mm de diâmetro), ea terceira camada contém um canal de entrada de mistura que os fãs antes de injeção na câmara perifusion (2 mm de largura, 19 mm de comprimento e 500 mm de altura) para otimizar a eficiência de mistura antes de entrar na câmara de perifusion. A criação de gradientes de glucose diversos, incluindo uma linear forma de sino, e formas quadradas também podem ser criados na rede perifusion microfluídicos e é demonstrada.
Protocol
A. Microfabricação de 3 camadas dispositivo perifusion microfluídicos Bem fundo Mestre Protocol (150 mM poços profundos) Limpe o wafer usando uma lâmina de barbear, se necessário. Limpe com acetona, metanol, e IPA. Realizar o tratamento de plasma de 50 Watts por 30 s. Spin-SU8-100 @ 2000 rpm. [Passo 1: 500 rpm, 10 s, 100 Passo rpm / s, 2: 2000 rpm, 30 s, a 300 rpm / s]. [NOTA: Não segure o wafer com uma pinça, após girar SU8] Bake mole do wafer a 6…
Discussion
Sistemas tradicionais de ilhotas perifusion (macroescala e microescala) tem algumas limitações, incluindo complexo de configuração e design, alta requisitos técnicos, e dificuldade para criar gradientes usuário prescritos química no sistema. O sistema perifusion microfluídicos descritas aqui supera estas limitações com geometria simples de projeto e fabricação. Mais importante, este sistema pode ser integrado com abordagem imagens de fluorescência que fornecem como uma ferramenta única para estudar a fisio…
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pela AAUW companheirismo internacional para Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) para Jose Oberholzer, e O Projeto Diabetes Chicago.
Adewola, A. F., Wang, Y., Harvat, T., Eddington, D. T., Lee, D., Oberholzer, J. A Multi-Parametric Islet Perifusion System within a Microfluidic Perifusion Device. J. Vis. Exp. (35), e1649, doi:10.3791/1649 (2010).