Ein mikrofluidischen Insel perifusion Gerät wurde für die Beurteilung der Dynamik der Insulinsekretion von mehreren Inselchen und gleichzeitige Fluoreszenz-Imaging von Calcium-Einstrom und die mitochondriale möglichen Veränderungen entwickelt.
Abstract
Ein mikrofluidischen Insel perifusion Gerät wurde für die Beurteilung der Dynamik der Insulinsekretion von mehreren Inselchen und gleichzeitige Fluoreszenz-Imaging von Calcium-Einstrom und die mitochondriale möglichen Veränderungen entwickelt. Das Gerät besteht aus drei Schichten: erste Schicht enthält eine Reihe von mikro-Brunnen (500 Mikrometer Durchmesser und 150 um Tiefe), die zu den Inseln zu immobilisieren, während ausgesetzt zu fließen und maximieren die exponierte Fläche der Inseln zu helfen, die zweite Schicht enthält eine kreisförmige perifusion Kammer (3 mm tief, 7 mm Durchmesser), und die dritte Schicht enthält einen Einlass-Mischkanal, dass die Fans vor der Injektion in die perifusion Kammer (2 mm in der Breite, 19 mm in der Länge und 500 pm in der Höhe) zur Optimierung der die Mischwirkung vor dem Eintritt in die perifusion Kammer. Die Schaffung verschiedener Glukose Gradienten mit einem linear, Glockenform, und quadratischen Formen können auch in der mikrofluidischen perifusion Netzwerk geschaffen werden, und demonstriert.
Protocol
A. Microfabrication der 3-Schicht-mikrofluidischen perifusion Gerät Bottom Well-Master Protokoll (150 um Tiefbrunnen) Reinigen Sie die Scheibe mit einer Rasierklinge, wenn nötig. Reinigung mit Aceton, Methanol und IPA. Führen Plasmabehandlung bei 50 Watt für 30 s. Spin SU8-100 @ 2000 rpm. [Schritt 1: 500 min, 10 s, 100 rpm / s, Schritt 2: 2000 rpm, 30 s, 300 rpm / s]. [Hinweis: Halten Sie nicht die Wafer mit einer Pinzette nach dem Schleudern SU8] Softb…
Discussion
Traditionelle Insel perifusion Systeme (makroskopischen und mikro-) einige Einschränkungen, einschließlich komplexer der Einrichtung und Design, hohe technische Anforderungen und Schwierigkeiten, benutzerdefinierte vorgeschriebenen chemischen Gradienten in das System zu erstellen. Die mikrofluidischen perifusion hier beschriebene System überwindet diese Einschränkungen mit einfachen Geometrie der Konstruktion und Fertigung. Noch wichtiger ist, kann dieses System mit Fluoreszenz-Imaging-Ansatz, die als ein einzigarti…
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde von AAUW internationalen Gemeinschaft zu Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) zu Jose Oberholzer, und die Chicago Diabetes-Projekt unterstützt.
Adewola, A. F., Wang, Y., Harvat, T., Eddington, D. T., Lee, D., Oberholzer, J. A Multi-Parametric Islet Perifusion System within a Microfluidic Perifusion Device. J. Vis. Exp. (35), e1649, doi:10.3791/1649 (2010).