Deze video-artikel beschrijft stap voor stap, hoe je een sperma monster proces om goede kwaliteit te bereiken fluorescentie<em> In situ</em> Hybridisatie op de menselijke spermatozoa. Verkregen preparaten kunnen gebruikt worden voor aneuploidie screening in de context van de klinische diagnose.
Aneuploïdieën zijn de meest voorkomende chromosomale afwijkingen bij de mens. De meeste van deze afwijkingen het gevolg zijn van fouten tijdens de meiose gametogene proces in de ouders. In de menselijke mannetjes, kunnen deze fouten leiden tot de productie van spermatozoa met numerieke chromosoomafwijkingen die een verhoogd risico van overdracht van deze afwijkingen aan het nageslacht te vertegenwoordigen.
Om deze reden heeft de techniek van fluorescentie in situ hybridisatie (FISH) op het sperma kernen wordt een protocol op grote schaal opgenomen in de context van de klinische diagnose. Deze werkwijze geeft een schatting van de frequenties van numerieke chromosoom afwijkingen in de gameten van de patiënten die zoeken naar genetische voortplanting advies.
Tot op heden, de chromosomen het vaakst opgenomen in het sperma FISH analyse zijn chromosomen X, Y, 13, 18 en 21.
Deze video-artikel beschrijft stap voor stap, hoe te verwerken en vast een menselijk sperma, hoe decondense en denatureren het sperma chromatine, hoe over te gaan tot zaadcellen visbereidingen te krijgen, en hoe u de resultaten op de microscoop zichtbaar te maken. Bijzondere opmerkingen van de meest relevante stappen worden gegeven aan de beste resultaten te bereiken.
Dit protocol beschrijft hoe menselijk sperma monsters proces voor het verkrijgen van sperma visbereidingen. Met behulp van dit protocol is het mogelijk om chromosomale afwijkingen te analyseren in mannelijke gameten. Spermatozoa aneuploidie screening heeft toepassingen hetzij in het kader van fundamenteel onderzoek en in de reproductieve advies aan onvruchtbare mannen. Hoewel in de klinische diagnose van de meest bestudeerde chromosomen zijn X, Y, 13, 18 en 21, andere commerciële probes voor een breed scala van chromos…
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd ondersteund door de Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437). De auteurs danken aan J. Blanco en F. Vidal voor hun toezicht en aanmoediging, en J. Lucas voor zijn technische bijstand.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
1,4-Dithiothreitol (DTT) | Material | Roche | 10197777001 | |
2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol | Material | Roche | 10708976001 | |
Acetic acid | Material | Merck | 100.063 | |
AneuVysion® Multicolor DNA Probe Kit
|
Material | Vysis Inc. | 32-161075
|
|
Centrifuge 5804R | Tool | Eppendorf | ||
Centrifuge tube | Material | Nunc | 347856 | |
Coplin jar (glass) | Material | Barloworld Scientific | Hellendahl (ZCT278) | |
Coplin jar (plastic) | Material | Deltalab | 191087 | |
Cover slips (15×15) | Material | Knittel gläser | 4600115 | |
Cover slips (18×18) | Material | Knittel gläser | 4600118 | |
Diamond pencil | Material | Hammacher | 335117010 | |
Ethanol | Material | Merck | 100.983 | |
Formamide | Material | Roche | 11814320001 | |
Freezer | Tool | Zanussi | ||
Gloves | Material | Sanyc | 101/3300 | |
HYBrite™ | Tool | Vysis Inc. | ||
Immersion Oil | Material | Olympus | 35505 | |
Incubator | Tool | Heraeus | ||
Methanol | Material | Merck | 106.009 | |
Micropipette | Material | Labsystems | Finnpipette (4500000) | |
Micropipette replacement tip | Material | Daslab | 16-2001 | |
Nail varnish | Material | Quo-cosmetics | ||
Olympus BX60 epifluorescence microscope | Tool | Olympus | Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red. | |
Pasteur Pipette | Material | Rubilabor | 211.0230 | |
Phase contrast microscope | Tool | Nikon Diaphot | ||
Plastic pipette (3ml) | Material | Deltalab | 200007 | |
Potassium chloride (KCl) | Material | Fluka | 60128 | |
Rubber cement | Material | Best-test | ||
Slides | Material | Knittel gläser | 4520022 | |
Slide Saver Boxes | Material | Deltalab | 19276.1 | |
Sterile container | Material | Deltalab | 409726 | |
Syringe | Material | PentaFerte | 002022300 | |
Thermometer | Material | Comark Instruments, Inc | KM12 | |
Tri-distilled water | Material | |||
Triton X-100 | Material | Sigma | 9002-93-1 | |
Tweezers | Material | B/Braun | Aesculap (BD224R) | |
Vertical laminar flow hood | Tool | Burdinola | OR-ST 1500 | |
Vortex mixer | Tool | Fisher Scientific | FB15012 | |
Water bath | Tool | Raypa® |