هذا الفيديو المقالة ، خطوة خطوة ، وكيفية معالجة عينة السائل المنوي لتحقيق نوعية جيدة من مضان<em> في الموقع</em> التهجين على الحيوانات المنوية البشرية. يمكن استخدامها للكشف عن الاستعدادات التي تم الحصول عليها عدم توازن الصبغيات في سياق التشخيص السريري.
Abstract
[أنيوبلويدي] هي شذوذ الكروموسومات الأكثر شيوعا لدى البشر. معظم هذه التشوهات الناتجة عن أخطاء أثناء عملية الانتصافي مكون للأعراس في الآباء. في الذكور الإنسان ، يمكن لهذه الأخطاء تؤدي الى انتاج الحيوانات المنوية مع شذوذ الكروموسومات العددية التي تمثل زيادة مخاطر انتقال هذه الحالات الشاذة في النسل.
لهذا السبب ، أصبح أسلوب التهجين مضان في الموضع (FISH) في نواة الحيوان المنوي بروتوكول أدرجت على نطاق واسع في سياق التشخيص السريري. هذه الممارسة توفر تقديرا للترددات شذوذ صبغي العددي في الأمشاج من المرضى التي تسعى للحصول على المشورة الإنجابية الوراثية.
حتى الآن ، فإن الكروموسومات في معظم الأحيان المدرجة في تحليل FISH الحيوانات المنوية هي الكروموسومات X ، Y ، 13 ، 18 و 21.
هذا الفيديو المقالة ، خطوة خطوة ، وكيفية معالجة وإصلاح عينة السائل المنوي البشري ، وكيفية decondense وتفسد لونين الحيوانات المنوية ، وكيفية المضي قدما للحصول على الاستعدادات السمكية الحيوانات المنوية ، وكيفية تصور النتائج في المجهر. وترد ملاحظات خاصة من الخطوات الأكثر ملاءمة لتحقيق أفضل النتائج.
Protocol
أولا تجهيز العينات وتثبيت الخلية ترك عينة السائل المنوي في حاويات معقمة في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقائق حتى تسييل. نقل العينة إلى أنابيب الطرد المركزي وانها تدور في 1000g لمدة 5 دقائق. <li sty…
Discussion
هذا البروتوكول توضح كيفية معالجة عينات السائل المنوي البشرية للحصول على الاستعدادات السمكية الحيوانات المنوية. باستخدام هذا البروتوكول أنه من الممكن لتحليل شذوذ الكروموسومات في الأمشاج الذكور. فحص الحيوانات المنوية وعدم توازن الصبغيات التطبيقات سواء في سياق البح…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل قطالونيا كتالونيا (2005 SGR00437). المؤلفان بالشكر إلى بلانكو وفيدال J. F. عن الإشراف والتشجيع ، وجيه لوكاس لمساعدته التقنية.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
1,4-Dithiothreitol (DTT)
Material
Roche
10197777001
2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol
Material
Roche
10708976001
Acetic acid
Material
Merck
100.063
AneuVysion® Multicolor DNA Probe Kit
20xSaline-Sodium Citrate
4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI II)
CEP 18/X/Y DNA probe
NP-40
LSI 13/21 DNA probe
Material
Vysis Inc.
32-161075
30-805850
30-804941
30-171077
30-804820
30-171078
Centrifuge 5804R
Tool
Eppendorf
Centrifuge tube
Material
Nunc
347856
Coplin jar (glass)
Material
Barloworld Scientific
Hellendahl (ZCT278)
Coplin jar (plastic)
Material
Deltalab
191087
Cover slips (15×15)
Material
Knittel gläser
4600115
Cover slips (18×18)
Material
Knittel gläser
4600118
Diamond pencil
Material
Hammacher
335117010
Ethanol
Material
Merck
100.983
Formamide
Material
Roche
11814320001
Freezer
Tool
Zanussi
Gloves
Material
Sanyc
101/3300
HYBrite™
Tool
Vysis Inc.
Immersion Oil
Material
Olympus
35505
Incubator
Tool
Heraeus
Methanol
Material
Merck
106.009
Micropipette
Material
Labsystems
Finnpipette (4500000)
Micropipette replacement tip
Material
Daslab
16-2001
Nail varnish
Material
Quo-cosmetics
Olympus BX60 epifluorescence microscope
Tool
Olympus
Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red.