Bu prosedür, birincil fare kemik iliği hematopoetik hücre kültürleri kurmak ve transfeksiyon Gene Verici MXCell elektroporasyon sistemini kullanarak takip nasıl açıklamaktadır.
Elektroporasyon birincil hücre içine plazmid DNA veya siRNA tanıtmak için en etkili yolu olduğu giderek daha belirgin hale gelmektedir. Gene Verici MXcell elektroporasyon sistemi ve Gen Verici elektroporasyon tampon, özellikle memeli hücrelerinde ve birincil ve kök cells.This video gibi zor-transfect hücreleri, nükleik asitlerin transfect geliştirilmiştir birincil fare kemik iliği hematopoetik hücre kültürleri nasıl kurulacağını gösteren ve sonra MXcell sistemi elektroporasyon için hazırlamak. Biz femur ve tibia izole ederek başlar. Femur ve tibia hem de kemik iliği biçilir ve kültürler kurulur. Kültüre kemik iliği hücreleri daha sonra transfekte ve analiz edilir.
Daha genomik bilgi ortaya çıkıyor ve böyle bir siRNA olarak yeni araçlar geliştirilmiştir, fizyolojik ilgili hücrelerin kullanımı, hastalık yolları, protein-protein etkileşimleri, ve sinyal iletimi anlayışımızı ilerletmek için her zamankinden daha önemli hale gelmiştir. İlköğretim hücreleri, dokuları veya sıvıları doğrudan elde edilen ve in vitro olarak yetiştirilmektedir. Bu hücreler, genetik materyalin eksojen tanıtım yoluyla yolları da dahil, bir dizi manipüle edilebilir. Bu plazmid DNA veya birincil hücre içine siRNA tanıtmak için en etkili yolu elektroporasyon olduğunu giderek daha belirgin hale gelmektedir.
Elektroporasyon geçici böylece ekzojen nükleik asitlerin hücre girmesine izin verir, hücre zarının geçirgenliğini artırmak amacıyla elektrik darbeleri hücreleri ortaya koyar. Transfeksiyon Bu yöntem, farklı hücre türleri / hatları ve, böylece mast hücrelerinin transfect kullanılabilir yanı sıra, diğer kemik iliği kaynaklı hücre arasındaki farklılıkların karşılamak için optimize edilebilir. Ayrıca, viral aracılı transfeksiyon aksine, elektroporasyon transfekte DNA boyutu sınırlar empoze, ne de kapsamlı bir hazırlık gerektirir değildir. Elektroporasyon lipid aracılı transfeksiyon aksine, daha az toksik olabilir ve transfekte nükleik asit endosomal yakalama sonuç vermez.
Bio-Rad, bu hücrelerin MXcell elektroporasyon sistemi için özel olarak geliştirilmiştir. MXcell transfeksiyon verimliliği ve hücre canlılığı en üst düzeye çıkarmak için şartlarda değişiklik sağlar. Transfeksiyon verimliliği optimize etmek ve hücre ölümü, voltaj elektroporasyon parametreleri de dahil olmak üzere bir çok en aza indirmek için, kondansatör, direnç ve nabız uzunluğu ayarlanabilir ve değerlendirilmelidir.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Gene Pulser MXcell Electroporation System | Bio-Rad | 165-2670 | ||
Gene Pulser Electroporation Buffer | Bio-Rad | 165-2677 |