הליך זה מתאר כיצד להקים ראשוני בתרביות תאים hematopoietic ממח העצם Murine ואחריו transfection באמצעות Pulser ג'ין מערכת MXCell electroporation.
זה הופך ברור יותר ויותר כי electroporation היא הדרך היעילה ביותר להציג את ה-DNA או פלסמיד siRNA לתוך תאים ראשוניים. Pulser ג'ין מערכת MXcell electroporation וג'ין Pulser חיץ electroporation פותחו במיוחד כדי transfect חומצות גרעין לתאי יונקים קשות transfect תאים, כגון וידאו cells.This יסודי גזע מדגים כיצד להקים ראשוני בתרביות תאים hematopoietic ממח העצם Murine ולאחר מכן להכין אותם electroporation במערכת MXcell. אנחנו מתחילים ידי בידוד עצם הירך לבין השוקה. מוח העצם של הירך והן השוקה נקצרים אז ותרבויות מבוססים. בתרבית תאים במח העצם הם transfected כך וניתח.
כאשר מידע גנטי יותר עולה וכלים חדשים כגון siRNA מפותחים, השימוש פיזיולוגית התאים הרלוונטיים הפך חשוב יותר מתמיד כדי לקדם את ההבנה שלנו של המסלולים המחלה, חלבונים אינטראקציות, ואת הולכת אותות. תאים ראשוניים מתקבלים ישירות לרקמות או נוזלים מעובד במבחנה. תאים אלה ניתן לטפל במספר דרכים, כולל באמצעות הקדמה של חומר גנטי חיצוני. זה הופך ברור יותר ויותר כי הדרך היעילה ביותר להציג את ה-DNA או פלסמיד siRNA לתוך תאים ראשוניים הוא electroporation.
Electroporation חושף תאים פולסים חשמליים על מנת transiently להגדיל את החדירות של קרום התא, ובכך לאפשר חומצות גרעין אקסוגניים להיכנס לתא. שיטה זו של transfection יכול להיות מותאם כדי להכיל את ההבדלים בין תאים מסוגים שונים / קווי, ולכן ניתן להשתמש בו כדי transfect תא הפיטום וכן כל מח עצם אחרות הנגזרות התא. יתר על כן, בניגוד transfection ויראלי בתיווך, electroporation אינה מטילה מגבלות על גודל של ה-DNA transfected, ולא דורשים הכנה נרחבת. בניגוד transfection השומנים בתיווך, electroporation יכול להיות פחות רעיל ואינו לגרום השמנה endosomal של חומצת גרעין transfected.
ביו רד פיתחה את מערכת electroporation MXcell במיוחד עבור תאים אלה. MXcell מאפשר לך להשתנות התנאים כדי למקסם את היעילות ואת הכדאיות transfection התא. כדי לייעל את נצילות transfection ולמזער מוות של תאים, מספר רב של פרמטרים electroporation כולל מתח, קיבול, התנגדות, אורך הפולס יכול להיות מותאם ומוערכת.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Gene Pulser MXcell Electroporation System | Bio-Rad | 165-2670 | ||
Gene Pulser Electroporation Buffer | Bio-Rad | 165-2677 |