O presente protocolo desenvolve uma técnica baseada em imagem para a densidade celular regional rápida, não destrutiva e livre de rótulos e a medição da viabilidade dentro dos agregados tumorais 3D. Os achados revelaram um gradiente de densidade celular, com densidades celulares mais altas em regiões centrais do que camadas externas no desenvolvimento de agregados e morte celular predominantemente periférica em agregados HER2+ tratados com Trastuzumab.