Il presente protocollo sviluppa una tecnica basata su immagini per la misurazione rapida, non distruttiva e priva di etichette della densità cellulare regionale e della vitalità all'interno di aggregati tumorali 3D. I risultati hanno rivelato un gradiente di densità cellulare, con densità cellulari più elevate nelle regioni centrali rispetto agli strati esterni nello sviluppo di aggregati e morte cellulare prevalentemente periferica negli aggregati HER2+ trattati con Trastuzumab.