Assessing Cellular Target Engagement by SHP2 (PTPN11) Phosphatase Inhibitors

00:04Introduction
01:04Transfection of HEK293T Cells
02:36Incubation of Cells with SHP2 Inhibitors
05:11Isothermal or Thermal Profile Gradient Heat Pulse
06:01Results: Cellular Target Engagement of Allosteric SHP2 Inhibitors with SHP2-WT and SHP2-E76K Proteins
08:03Conclusion

Summary

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A capacidade de avaliar o engajamento de alvos por inibidores candidatos em células intactas é crucial para a descoberta de drogas. Este protocolo descreve um ensaio de mudança térmica celular de formato 384 que detecta de forma confiável o engajamento de alvos celulares de inibidores visando shp2 tipo selvagem ou suas variantes oncogênicas.

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Amplificação de genoma pré-enriquecimento e toda célula alvo para jusante caracterização única célula

Avaliação da resistência aos inibidores de tirosina quinase por um interrogatório das vias de transdução de sinal por matrizes de anticorpo

Modelo de pulmão acelular e celular para estudar o Tumor metástase

Um ensaio de imunoprecipitação da cromatina para identificar Genes-alvo NFAT2 novela em leucemia linfocítica crônica

Um ensaio de matança Spheroid por pilhas de T do carro

Usando Microarrays para interrogar o impacto microambiental em phenotypes celulares no cancro

Caracterizar Mutants relacionados à doença da família da RAF kinases usando um conjunto de métodos práticos e viáveis

Caracterização dos efeitos de inibidores de Migrastatic na invasão do spheroid do tumor 3D pela microscopia confocal de alta resolução

Identificação de reguladores de fatores de transcrição usando triagem de média-duração de bibliotecas arrayed e um repórter baseado em dupla-luciferase

Avaliando o engajamento de alvos celulares por inibidores de fosfattase de PHOsphatase

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