וידאו זה מדגים כיצד לשמר את הצמיחה של בתאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) בתא ללא תנאים מזין וכיצד ברציפות hESCs מעבר במזין תא ללא תנאים. אישור hESC pluripotency גדל מזין תאים ללא תנאים על ידי מיקרוסקופ immunofluorescence באה לידי ביטוי גם. חלק 2 מתוך 3.
Abstract
וידאו זה מדגים כיצד לגדול בתאי גזע עובריים אנושיים (hESCs) על פיברובלסטים עכבר עובריים (MEF) תאים מזין, איך hESCs קטע מתוך צלחות MEF לתא ללא מזין צלחות Matrigel.
Protocol
תרבות hESC יומי תחזוקה תרבות התקשורת hESC יש לשנות את כל 24 שעות. מתוך הבקבוק ES מניות המדיה המאוחסנים ב 4 ° C, להוציא את כמות הפתרון הדרוש (~ 20ml לכל צלחת 6-היטב), מקום בצינור בז 50 מ"ל, וחמים עד 37 מעלות צלזיוס באמבט מים. ברגע התקש…
Discussion
סרט הווידאו הזה מדגים כיצד hESCs קטע מתוך צלחות MEF לתא ללא צלחות מזין Matrigel. שים לב כי צפיפות המושבה על Matrigel הוא גבוה יותר מאשר צפיפות מושבות ידי פיצול כרגיל על MEFs. מכתים immunofluorescence ו cytometry מיקרוסקופית או זרימה עבור סמנים hESC pluripotency, כגון אוקטובר-4 ו SSEA-4, יש צורך לאשר אחזקת hESCs במצב מובחן ?…
Acknowledgements
האדם מחקרים בתאי גזע עובריים במעבדה Teitell נתמכים על ידי המכון לרפואה בקליפורניה הרגנרציה (CIRM) זרע מענק RS1-00313. אנו מודים לחברי המרכז רחבה של רפואה רגנרטיבית ואת המחקר בתאי גזע ב-UCLA, במיוחד ד"ר Amander קלארק, ד"ר ג'רום זק, וחברי רחבה UCLA מכון מתקן נייד Core גזע על תמיכתם של מחקרים שלנו.
Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts .Science. 282, 1145-1147 (1998).
Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.Nature Biotechnology. 19, 971-974 (2001).
Khvorostov, I., Zhang, J., Teitell, M. From MEFs to Matrigel 2: Splitting hESCs from MEFs onto Matrigel. J. Vis. Exp. (16), e831, doi:10.3791/831 (2008).