Актина сотрудничества седиментации Пробирной; для анализа связывание белка с F-актин
Summary
Белки связываются с нитчатые актина (Ф-актин), через различные актина обязательные модули. В этом видео мы продемонстрируем процедуры актина совместного осаждения, которая в пробирке анализ обычно используется для анализа белков или конкретных областях, которые связывают F-актина.
Abstract
Актина цитоскелета в клетке представляет собой сеть из нитей актина, который позволяет движение клеток и клеточных процессов, и это создает напряжение и помогает поддерживает сотовые форму. Хотя цитоскелета актина является жесткой структурой, это динамическая структура, которая постоянно ремоделирования. Количество белков могут быть привязаны к актина цитоскелета. Связывания конкретного белка в F-актин часто желаемое для поддержки ячейки биологических наблюдений или для более глубокого понимания динамических процессов за счет реконструкции актина цитоскелета. Актина совместного осаждения анализа является анализ в лабораторных обычно используется для анализа связывания специфических белков или белковых доменов с F-актина. Основные принципы анализа привлекать инкубации белок (полной длины или области) с F-актин, ультрацентрифугирования шаг к гранулы F-актин и анализа белков совместно осаждающихся с F-актина. Актина совместного осаждения анализов могут быть разработаны соответственно для измерения аффинности связывания актина и в анализах конкуренции.
Protocol
Discussion
Актина совместного отстаивания просто в пробирке анализа для анализа белков specfic связывания с F-актина. В этом видео мы покажем один пример того, как простой актина совместного осаждения может быть осуществлена. Мы покажем, как готовить F-актин, подготовить белка для проверки и процедуры актина сов…
Acknowledgements
Спасибо доктору Praveen Kumar в Wittman лаборатории в UCSF для фильма актина в НаСаТ клеток.
References
- Senetar, M. A., Foster, S. J., McCann, R. O. Intrasteric inhibition mediates the interaction of the I/LWEQ module proteins Talin1, Talin2, Hip1, and Hip12 with actin. Biochemistry. 14, 15418-15428 (2004).
- Goldmann, W. H., Hess, D., Isenberg, G. The effect of intact talin and talin tail fragment on actin filament dynamics and structure depends on pH and ionic strength. Eur J Biochem. 260, 439-445 (1999).
- Lee, H., Bellin, R. M., Walker, D. L., Patel, B., Powers, P., Liu, H., Garcia-Alvarez, B., de Pereda, J., Liddington, R. C., Volkmann, N., Hanein, D., Critchley, D. R., Robson, R. M. Characterization of an Actin-binding Site within the Talin FERM Domain. J Mol Biol. 22, 771-784 (2004).
