本プロトコルは、Illuminaベースの16S rRNA遺伝子配列決定を使用して腸内細菌叢を分析する方法を説明し、ハーブ煎じ薬の有効性を評価するためのフレームワークを提供します。
ラットの胃炎および腸内細菌叢に対する Desmodium caudatum の影響を予備的に調査するために、古典的なサリチル酸ナトリウム法を使用して慢性胃炎ラットモデルが確立されました。18匹のSPFラットを、対照群(C群)、モデル群(M群)、治療群(T群)の3群に分けた。胃壁の病理学的切片は、各グループのラットから採取されました。さらに、各群のラットの血清中のガストリンおよびマロンジアルデヒドの濃度をELISAにより測定した。さらに、胃炎のラットの腸内細菌叢に対する D. caudatum の影響は、Illuminaベースの16S rRNA遺伝子配列決定を用いて、3つのグループの腸内細菌群集の詳細な比較を通じて調査されました。結果は、 D. caudatum 煎じ薬がマロンジアルデヒド含有量を減少させ、ガストリン含有量を増加させる可能性があることを示しました。さらに、 D. caudatum 煎じ薬は、腸内細菌叢の多様性と豊富さを高め、腸内細菌叢を調節および回復させることにより、胃炎の治療にプラスの影響を与えることがわかっています。
最も一般的な臨床疾患の1つである慢性胃炎(CG)は、胃粘膜上皮の慢性的かつ持続的な炎症性変化を特徴とし、さまざまな病原性因子によって頻繁かつ繰り返し攻撃されます1。胃疾患の罹患率は胃疾患の中で第1位であり、消化器内科2の外来受診率の40%から60%を占めています。さらに、発生率は一般的に年齢とともに増加し、特に中高年の個人では3。間違いなく、CGは人々の生活の質を著しく低下させ、新しい治療薬を発見する必要性を強調しています。
CGの発生と発症は、ガストリン(GAS)などの消化管ホルモンの分泌に関連していることが多くの研究で報告されています4,5。消化管によく見られる消化管ペプチドホルモンであるガスは、好酸球からのヒスタミンの放出を促進することにより、細胞を刺激して胃酸を分泌させます。さらに、胃粘膜の栄養と血液供給を改善し、胃粘膜と頭頂細胞の増殖を促進します6。したがって、ガストリンはCGの発達レベルを評価する指標として利用することができます。さらに、反応性酸化物によって引き起こされる脂質過酸化生成物は、炎症細胞を活性化し、CGにつながる可能性があります。脂質過酸化マーカーであるマロンジアルデヒド(MDA)は、酸化ストレスの程度を測定するために一般的に使用される指標です。これは、胃粘膜内のフリーラジカルのレベルをある程度反映しています。MDAレベルは、フリーラジカルによって引き起こされる局所胃粘膜の不飽和脂肪酸の攻撃を示すことができます7,8。
腸内微生物生態学は、宿主の腸内に生息する何百万もの微生物で構成されており、宿主の健康を維持し、宿主の免疫を調節する上で重要な役割を果たしています。健康な腸内細菌叢は、高い豊かさ、多様性、安定した微生物叢機能を特徴とし、代謝に関与することにより、病原微生物の侵入に対する防御バリアとして機能します。腸内細菌叢の乱れは、個人を急性および慢性の胃腸疾患にかかりやすくします9,10。近年、消化器疾患に対する微生物叢療法が急速に進歩し、有意な有効性が実証されています11。要約すると、腸内細菌叢の考慮は、胃腸疾患を理解し、対処する上で非常に重要です。
民間薬品は、漢方薬の宝庫に欠かせない要素として、臨床と国民医療の近代化にとって大きな意味を持っています。Desmodium caudatum (Thunb.)の根と全体の部分。DC.は、綿陽市の北川強地区で胃の不快感を和らげるために長期間広く使用されています。いくつかの論文は、止血、抗酸化、胃腸保護などの効果を挙げて、D. caudatumによる胃腸疾患の治療の科学的根拠を示しています12,13,14。ただし、詳細な研究が不足しているため、臨床薬力学メカニズムは確立されていません。この記事は、胃腸ホルモンと腸内細菌叢に基づいて胃炎の治療におけるD.caudatumの効果を研究し、その合理的な臨床応用の基礎を提供することを目的としています。
D. caudatumは、Qiang nationality12で一般的に使用されている民間療法であり、胃腸疾患の治療に大きな有効性を示しています。現代の薬理学的研究の進歩に伴い、胃腸の微小生態学の不均衡に起因する細菌叢の不均衡は、急性および慢性の胃腸疾患の重要な要因として特定されています22,23。腸管内の特定の微生物は、体内の動的…
The authors have nothing to disclose.
この研究は、四川省科学技術局の重点研究開発プロジェクト(2020YFS0539)から資金提供を受けました。
Alpha diversity analysis | Mothur 1.30.2 | ||
AxyPrep deoxyribonucleic acid (DNA) gel extraction kit | Axygen Biosciences | AP-GX-50 | |
Beta diversity analysis | Qiime 1.9.1 | ||
Cryogenic refrigerator | Forma-86C ULT freezer | ||
Desmodium caudatum | The Traditional Chinese Medicine Hospital of Beichuan Qiang Autonomous County | ||
E.Z.N.A. soil kit | Omega Bio-tek | D5625-01 | |
Illumina MiSeq Platform | Illumina Miseq PE300/NovaSeq PE250 | ||
Multiskan Spectrum | spectraMax i3 | ||
OTU clustering | Uparse 7.0.1090 | ||
OTU statistics | Usearch 7.0 | ||
PCR instrument | TransGen AP221-02 | ||
PCR instrument | ABI GeneAmp 9700 | ||
QuantiFluor-ST double-stranded DNA (dsDNA) system | Promega Corp. | ||
Sequence classification annotation | RDP Classifier 2.11 | ||
Sodium salicylate | Sichuan Xilong Chemical Co., Ltd | 54-21-7 | |
SPF rats | Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd | ||
SPSS 18.0 | IBM |