Técnica cirúrgica para ganglionectomia cervical superior em modelo murino
Summary
O presente protocolo descreve um modelo murino de ablação de inervação adrenérgica através da identificação e ressecção do gânglio cervical superior.
Abstract
Evidências crescentes sugerem que o sistema nervoso simpático desempenha um papel importante na progressão do câncer. A inervação adrenérgica regula a secreção das glândulas salivares, o ritmo circadiano, a degeneração macular, a função imune e a fisiologia cardíaca. A simpatectomia cirúrgica murina é um método para estudar os efeitos da inervação adrenérgica, permitindo a ablação adrenérgica completa e unilateral, evitando a necessidade de intervenção farmacológica repetida e os efeitos colaterais associados. No entanto, a simpatectomia cirúrgica em camundongos é tecnicamente desafiadora devido ao pequeno tamanho do gânglio cervical superior. Este estudo descreve uma técnica cirúrgica para identificar e ressecar de forma confiável o gânglio cervical superior para abater o sistema nervoso simpático. A identificação e remoção bem-sucedidas do gânglio são validadas por imagem dos gânglios simpáticos fluorescentes usando um camundongo transgênico, identificando a síndrome de Horner pós-ressecção, marcando para marcadores adrenérgicos nos gânglios ressecados e observando imunofluorescência adrenérgica diminuída nos órgãos-alvo após simpatectomia. Este modelo possibilita estudos futuros da progressão do câncer, bem como de outros processos fisiológicos regulados pelo sistema nervoso simpático.
Introduction
Vários estudos têm relatado que os nervos no microambiente tumoral desempenham um papel ativo no suporte à progressão tumoral. Demonstrou-se que a ablação dos nervos simpáticos adrenérgicos prejudica o desenvolvimento e a disseminação tumoral no câncer de próstata e gástrico in vivo 1,2,3, enquanto o bloqueio farmacológico dos receptores adrenérgicos inibe o crescimento tumoral no câncer de cabeça epescoço4. O envolvimento simpático neural também tem sido descrito na progressão dos carcinomas pancreáticos, cervicais e basocelulares5,6,7.
Dentro do sistema nervoso simpático, o gânglio cervical superior (GCS) é o único gânglio do tronco simpático que inerva a cabeça. O GCE regula várias funções fisiológicas, como secreção salivar e ritmo circadiano, e inerva diretamente os linfonodos cervicais 8,9,10. A GCE também tem sido implicada em processos patológicos como a degeneração macular11 e a progressão da dissecção aórtica12. Além disso, foi relatado que a ressecção da GCE agrava a lesão renal aguda induzida por isquemia e reperfusão13 e também altera a microbiota intestinal em ratos14.
A ablação completa do SCG em um modelo de camundongo representaria uma técnica experimental valiosa para viabilizar a pesquisa do câncer e do sistema nervoso autônomo. Enquanto muitos estudos têm utilizado o bloqueio farmacológico dos receptores adrenérgicos como ablação adrenérgica 15,16,17,18,19,20, a ressecção cirúrgica permite a ablação adrenérgica completa e unilateral, evitando a necessidade de repetidas intervenções farmacológicas e os efeitos colaterais associados 21,22,23.
A ressecção cirúrgica do GCE tem sido descrita emratos24, e a maioria dos relatos estudando o efeito da ganglionectomia cervical superior (GCSx) tem empregado o modelo de ratos. Em comparação com o modelo de rato, SCGx é tecnicamente mais desafiador em camundongos devido ao pequeno tamanho do SCG. No entanto, os camundongos são comparativamente mais fáceis de manusear, mais econômicos e mais passíveis de manipulação genética. Garcia e col. foram um dos primeiros a relatar a SCGx em camundongos, e descobriu-se que ela afeta a liberação de insulina25. Mais recentemente, Ziegler e col. descreveram a SCGx em camundongos com base na técnica publicada descrita pararatos24,26. Este e outros artigos descrevem um método no qual a artéria carótida comum (ACC) é primeiramente identificada e dissecada, e o GCS é posteriormente removido da bifurcação da ACC21,22,27,28. Neste artigo, uma técnica menos invasiva e segura é descrita em camundongos que evita a dissecção da ACC, minimizando assim a complicação mais grave desse procedimento – o sangramento de uma lesão na ACC.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este protocolo descreve um modelo de camundongo para ablação unilateral cirúrgica da entrada do SCG. Esta técnica permite estudar os efeitos da inervação adrenérgica em vários contextos. Além disso, o gânglio simpático ressecado também pode ser cultivado em cultura matrigel3D para experimentos in vitro30.
Estudos envolvendo GCSx têm sido realizados principalmente em ratos, pois sua anatomia maior permite fácil visualização anatômica e dissecç?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Q. W. foi apoiado pelo NIH T32CA009685. R. J. W. foi apoiado pelo NIH R01CA219534. As instalações centrais do Memorial Sloan Kettering Cancer Center foram apoiadas pelo NIH P30CA008748.
Materials
| Anti-Tyrosine Hydroxylase Antibody | EMD Millipore | AB152 | |
| Artificial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment | Akorn | 59399-162-35 | |
| Curity 2 x 2 Inch Gauze Sponge 8 Ply, Sterile | Covidien | 1806 | |
| Derf Needle Holder | Thomas Scientific | 1177K00 | |
| Dissecting Microscope | |||
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| ETHILON Nylon Suture | Ethicon | 698H | |
| Fine Scissors – ToughCut | Fine Science Tools | 14058-09 | |
| Hypoallergenic Surgical Tape | 3M Blenderm | 70200419342 | |
| Induction Chamber, 2 Liter | VetEquip | 941444 | |
| Isoflurane | Baxter | 1001936060 | |
| Nair | Church & Dwight Co., Inc | 40002957 | chemical hair removing agent |
| NORADRENALINE RESEARCH ELISA | Labor Diagnostika Nord (Rocky Mountain Diagnostics) | BA E-5200 | |
| NSG Mouse | Jackson Laboratory | JAX:005557 | |
| Povidone-Iodine Swabstick | PDI | S41350 | |
| Webcol Alcohol Preps | Covidien | 5110 |
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