Diese Arbeit beschreibt ein neuartiges Mausmodell für den Übergang von Pneumokokken von einem asymptomatischen Kolonisator zu einem krankheitsverursachenden Erreger während einer Virusinfektion. Dieses Modell kann leicht angepasst werden, um polymikrobielle und Wirt-Pathogen-Interaktionen während der verschiedenen Phasen des Krankheitsverlaufs und über verschiedene Wirte hinweg zu untersuchen.
Streptococcus pneumoniae (Pneumokokken) ist bei den meisten Menschen ein asymptomatischer Kolonisator des Nasen-Rachen-Raumes, kann sich aber bei einer Infektion mit dem Influenza-A-Virus (IAV) zu einem pulmonalen und systemischen Erreger entwickeln. Das fortgeschrittene Alter erhöht die Anfälligkeit des Wirts für sekundäre Pneumokokken-Pneumonien und ist mit einer Verschlechterung des Krankheitsverlaufs verbunden. Die Wirtsfaktoren, die diese Prozesse antreiben, sind nicht gut definiert, was zum Teil auf einen Mangel an Tiermodellen zurückzuführen ist, die den Übergang von einer asymptomatischen Kolonisierung zu einer schweren klinischen Erkrankung reproduzieren.
Diese Arbeit beschreibt ein neuartiges Mausmodell, das den Übergang von Pneumokokken von der asymptomatischen Übertragung zur Krankheit nach einer Virusinfektion nachbildet. In diesem Modell werden Mäuse zunächst intranasal mit im Biofilm gezüchteten Pneumokokken beimpft, um eine asymptomatische Übertragung zu erreichen, gefolgt von einer IAV-Infektion sowohl des Nasen-Rachenraums als auch der Lunge. Dies führt zu einer bakteriellen Ausbreitung in die Lunge, einer Lungenentzündung und offensichtlichen Krankheitsanzeichen, die bis zur Letalität führen können. Der Grad der Erkrankung ist abhängig vom Bakterienstamm und den Wirtsfaktoren.
Wichtig ist, dass dieses Modell die Anfälligkeit des Alterns reproduziert, denn im Vergleich zu jungen Mäusen zeigen alte Mäuse schwerere klinische Erkrankungen und erliegen häufiger der Krankheit. Durch die Aufteilung von Übertragung und Krankheit in verschiedene Schritte und die Möglichkeit, die genetischen Varianten sowohl des Erregers als auch des Wirts zu analysieren, ermöglicht dieses S. pneumoniae/IAV-Koinfektionsmodell die detaillierte Untersuchung der Interaktionen eines wichtigen Pathobolds mit dem Wirt in verschiedenen Phasen des Krankheitsverlaufs. Dieses Modell kann auch als wichtiges Werkzeug zur Identifizierung potenzieller therapeutischer Ziele gegen sekundäre Pneumokokken-Pneumonien bei empfänglichen Wirten dienen.
Streptococcus pneumoniae (Pneumokokken) sind grampositive Bakterien, die sich asymptomatisch im Nasen-Rachen-Raum der meisten gesunden Personen befinden 1,2. Begünstigt durch Faktoren, die nicht vollständig definiert sind, können Pneumokokken von gutartigen Kolonisatoren des Nasen-Rachen-Raums zu Krankheitserregern übergehen, die sich auf andere Organe ausbreiten und zu schweren Infektionen führen, einschließlich Mittelohrentzündung, Lungenentzündung und Bakteriämie3. Das Erscheinungsbild einer Pneumokokkenerkrankung hängt zum Teil von stammspezifischen Unterschieden ab, einschließlich des Serotyps, der auf der Zusammensetzung der Kapselpolysaccharide basiert. Bisher wurden über 100 Serotypen charakterisiert, von denen einige mit invasiveren Infektionen assoziiert sind 4,5. Mehrere andere Faktoren erhöhen das Risiko einer Pneumokokken-Erkrankung. Ein solcher Faktor ist die Virusinfektion, bei der das Risiko einer Pneumokokken-Pneumonie durch IAV um das 100-fache erhöht ist 6,7. Historisch gesehen ist S. pneumoniae eine der häufigsten Ursachen für sekundäre bakterielle Pneumonien nach Influenza und wird mit schlechteren Ergebnissen in Verbindung gebracht8. Ein weiterer großer Risikofaktor ist das fortgeschrittene Alter. Tatsächlich ist S. pneumoniae die Hauptursache für ambulant erworbene bakterielle Pneumonien bei älteren Menschen über 65 Jahren 9,10. Ältere Menschen machen die Mehrheit (>75%) der Todesfälle aufgrund von Lungenentzündung und Influenza aus, was darauf hindeutet, dass die beiden Risikofaktoren – Alterung und IAV-Infektion – die Krankheitsanfälligkeit synergistisch verschlechtern11,12,13,14. Die Mechanismen, durch die eine Virusinfektion den Übergang von Pneumokokken von asymptomatischen Kolonisatoren zu invasiven Erregern bewirkt, und wie dies durch Wirtsfaktoren beeinflusst wird, sind jedoch noch wenig geklärt. Dies ist vor allem auf das Fehlen eines Kleintiermodells zurückzuführen, das den Übergang von der asymptomatischen Pneumokokken-Besiedlung zur kritischen klinischen Erkrankung rekapituliert.
Koinfektionsstudien wurden klassischerweise an Mäusen durchgeführt, die 7 Tage nach einer Influenzainfektion mit Pneumokokken direkt in die Lunge inokuliert wurden15,16. Dies reproduziert die Anfälligkeit für sekundäre bakterielle Pneumonien und ist ideal, um zu untersuchen, wie antivirale Immunantworten die antibakterielle Abwehr beeinträchtigen17. Längsschnittstudien am Menschen haben jedoch gezeigt, dass der Pneumokokken-Transport im Nasopharynx, wo die Bakterien asymptomatische Biofilme bilden können18, einheitlich mit invasiven Erkrankungen assoziiert ist19,20. Bakterielle Isolate aus Infektionen des Mittelohrs, der Lunge und des Blutes sind genetisch identisch mit denen, die im Nasen-Rachen-Raum vorkommen20. Um den Übergang von einer asymptomatischen Trägerkrankheit zu einer invasiven Erkrankung nach einer IAV-Infektion zu untersuchen, wurde daher ein Modell etabliert, in dem Mäusen intranasal Biofilm-gewachsene Pneumokokken verabreicht wurden, gefolgt von einer IAV-Infektion des Nasopharynx21,22. Eine Virusinfektion der oberen Atemwege führte zu Veränderungen in der Wirtsumgebung, die zur Ausbreitung von Pneumokokken aus Biofilmen und deren Ausbreitung in die unteren Atemwege führten21. Diese dispergierten Bakterien wiesen eine hochregulierte Expression von Virulenzfaktoren auf, die für die Infektion wichtig sind, und wandelten sie von Kolonisatoren in Krankheitserreger um21. Diese Beobachtungen verdeutlichen die komplexe Interaktion zwischen Virus, Wirt und Bakterien und zeigen, dass die durch eine Virusinfektion ausgelösten Veränderungen des Wirts einen direkten Einfluss auf das Verhalten der Pneumokokken haben, was wiederum den Verlauf der bakteriellen Infektion verändert. Dieses Modell ist jedoch nicht in der Lage, die beim Menschen beobachteten schweren Krankheitszeichen zu rekapitulieren, wahrscheinlich weil das Virus auf die Nasenhöhle beschränkt ist und die systemischen Auswirkungen einer Virusinfektion auf die Immunität des Wirts und die Lungenschädigung nicht rekapituliert werden.
Wir haben kürzlich ein Modell entwickelt, das die komplexe Interaktion zwischen Wirt und Krankheitserregern berücksichtigt, aber auch die beim Menschen beobachtete Schwere der Krankheit genauer nachahmt23. In diesem Modell werden Mäuse zunächst intranasal mit im Biofilm gewachsenen Pneumokokken infiziert, um eine asymptomatische Übertragung zu erreichen, gefolgt von einer IAV-Infektion sowohl des Nasen-Rachenraums als auch der Lunge. Dies führte zu einer bakteriellen Ausbreitung in die Lunge, einer Lungenentzündung und einer Erkrankung, die bei einem Bruchteil der jungen Mäuse tödlich endete23. Diese frühere Studie zeigte, dass sowohl eine virale als auch eine bakterielle Infektion die Abwehr des Wirts veränderten: Die Virusinfektion förderte die bakterielle Verbreitung, und eine vorherige bakterielle Besiedlung beeinträchtigte die Fähigkeit des Wirts, den pulmonalen IAV-Spiegel zu kontrollieren23. Die Untersuchung der Immunantwort zeigte, dass eine IAV-Infektion die antibakterielle Aktivität der neutrophilen Granulozyten verringerte, während die bakterielle Besiedlung die für die antivirale Abwehr entscheidende Typ-I-Interferonantwort abstumpfte23. Wichtig ist, dass dieses Modell die Anfälligkeit des Alterns reproduziert. Im Vergleich zu jungen Mäusen zeigten alte Mäuse früher Krankheitsanzeichen, zeigten schwerere klinische Erkrankungen und erlagen häufiger einer Infektion23. Die in diesem Manuskript vorgestellte Arbeit zeigt, dass der Ausmaß der Erkrankung auch vom Bakterienstamm abhängt, da invasive Pneumokokkenstämme eine effizientere Ausbreitung bei IAV-Infektion zeigen, offenkundigere Anzeichen einer Lungenentzündung zeigen und im Vergleich zu nicht-invasiven Stämmen zu beschleunigten Krankheitsraten führen. Somit erlaubt dieses S. pneumoniae/IAV-Koinfektionsmodell die detaillierte Untersuchung sowohl von Erreger- als auch von Wirtsfaktoren und eignet sich gut für die Untersuchung von Immunantworten auf polymikrobielle Infektionen in den verschiedenen Phasen des Krankheitsverlaufs.
Die meisten der existierenden experimentellen Studien zu S. pneumoniae/IAV-Koinfektionen beruhen auf der bakteriellen Abgabe in die Lunge von Mäusen, die bereits mit IAV infiziert waren. Diese Modelle haben dazu beigetragen, Veränderungen im Lungenmilieu und in der systemischen Immunantwort zu identifizieren, die den Wirt anfällig für sekundäre bakterielle Infektionen machen 15,16,17,32,33,34,35,36,37. Diese Modelle haben es jedoch nicht geschafft, den Übergang von S. pneumoniae von einem asymptomatischen Kolonisator zu einem Erreger nachzuahmen, der schwere Lungen- und systemische Infektionen verursachen kann. Darüber hinaus sind diese Modelle nicht geeignet, um die Wirtsfaktoren und Wirt-Pathogen-Interaktionen in den oberen Atemwegen zu untersuchen, die zur Anfälligkeit für Infektionen beitragen. Ein früheres Modell für die Bewegung von Pneumokokken vom Nasopharynx in die Lunge nach einer IAV-Infektion beruhte auf einer bakteriellen Infektion des Nasopharynx gefolgt von einer Virusinfektion. Die bei menschlichen Patienten beobachteten schweren Krankheitssymptome konnten jedoch nicht reproduziertwerden 21. Das hier beschriebene modifizierte murine Infektionsmodell rekapituliert den Übergang von S. pneumoniae von einer asymptomatischen Übertragung zu einem Erreger, der eine schwere klinische Erkrankung verursacht.
Ein wichtiger Schritt dieses Modells ist die Etablierung einer S. pneumoniae-Infektion im Nasen-Rachenraum. Streptococcus pneumoniae bilden Biofilme und besiedeln den Nasopharynx mit unterschiedlichen Wirkungsgraden21,38. Um eine konsistente Infektion herzustellen, sind mindestens 5 × 106 KBE der bisher getesteten Biofilm-gezüchteten Bakterienstämme erforderlich23. Es wird empfohlen, jeden neuen Bakterienstamm vor einer Virusinfektion auf eine stabile Infektion des Nasen-Rachen-Raums zu testen. Für die virale Koinfektion haben frühere Studien ergeben, dass eine intranasale Infektion mit IAV für die Ausbreitung der Bakterien aus dem Nasopharynx erforderlich ist21,22,23. In diesen früheren Studien wurden 500 PFU IAV für die intranasale Verabreichung verwendet, während in dieser Studie 200 PFU ausreichten, um die Bakterienzahl im Nasopharynx zu erhöhen. Die IAV-Infektion ist nicht auf die oberen Atemwege beschränkt und kann sich auf die Lunge ausbreiten39,40, was entscheidend ist, um das Lungenmilieu für bakterielle Infektionen durchlässiger zu machen15,16,41. Die Abgabe von IAV in die Lunge kann entweder durch intranasale Verabreichung oder intratracheale Implantation von anästhesierten Mäusen erfolgen. Frühere Arbeiten mit BALB/cByJ-Mäusen ergaben, dass die intranasale Verabreichung zu einer viralen Pneumonie führt21; Der Zugang des Inokulums zur Lunge nach intranasaler Inokulation ist bei C57BL/6-Mäusen jedoch eingeschränkter. Bei C57BL/6-Mäusen ist eine intratracheale Implantation für eine konsistente Abgabe des Virus erforderlich23. In diesem Modell beschleunigt eine vorherige bakterielle Besiedlung das Auftreten von Krankheitssymptomen nach Virusinfektion23. Da eine Virusinfektion selbst Krankheitssymptome mit potenzieller Variation der Kinetik verursachen kann, wird empfohlen, zunächst eine Reihe von Dosen für jeden neu getesteten Virusstamm zu testen und eine Dosis zu wählen, die eine beschleunigte Kinetik in koinfizierten Wirten zeigt.
Die Lunge liefert in diesem Modell einen weiteren wichtigen Messwert für die Bewertung von Krankheiten. Für die Abschätzung der Erregerlast und des Immunzelleinstroms kann eine Lunge derselben Maus verwendet werden. Da der Schweregrad der Infektion und der Entzündung jedoch zwischen den Lappen unterschiedlich sein können, wird empfohlen, für die verschiedenen Untersuchungen keine verschiedenen Lappen derselben Lunge zu verwenden. Vielmehr können alle Lappen in kleine Stücke zerkleinert, gut miteinander vermischt und dann für die verschiedenen Bewertungen gleichmäßig analysiert werden. In ähnlicher Weise kann der Nasopharynx für die Zählung von bakterieller KBE oder viraler PFU und der Immunantwort verwendet werden. Die Anzahl der Zellen, die aus den Waschungen und dem Gewebe gewonnen werden, ist jedoch zu gering, um eine Durchflusszytometrie durchzuführen, ohne die Proben von Mäusen innerhalb derselben Gruppe zusammenzufassen. Alternativ kann eine Entzündung im Nasen-Rachen-Raum histologisch beurteiltwerden 23.
Ein entscheidendes Merkmal dieses Modells ist, dass es die klinische Erkrankung, die bei Patienten beobachtet wurde, rekapituliert. Beim Menschen führt eine sekundäre Pneumokokken-Pneumonie nach einer IAV-Infektion häufig zu offensichtlichen Krankheitsanzeichen wie Husten, Dyspnoe, Fieber und Muskelschmerzen, die zu Krankenhausaufenthalten, Atemversagen und sogar zum Tod führen können 8,15,42,43. Dieses Modell rekapituliert die schweren Anzeichen klinischer Erkrankungen, die beim Menschen in Bezug auf Atembeschwerden (die sich im Atemwert widerspiegeln) und allgemeines Unwohlsein (spiegelt sich in den Haltungs- und Bewegungswerten wider) der Mäuse sowie den Tod bei einigen der gesunden jungen Kontrollen beobachtet haben. Die verschlimmerten Krankheitssymptome bei koinfizierten Mäusen sind wahrscheinlich sowohl auf die bakterielle Ausbreitung in die Lunge als auch auf eine gestörte Virusclearance bei Mäusen mit Pneumokokken-Trägerzurückzuführen 23. Eine Einschränkung des Modells besteht darin, dass die Inzidenz klinischer Erkrankungen und bakterieller Ausbreitung aus dem Nasopharynx zwischen Mäusen variiert und vom Bakterienstamm, dem Wirtsalter und dem Genotypbeeinflusst wird 21,22,23. Aus diesem Grund kann bei invasiven Stämmen das Fortschreiten von einer lokalisierten Infektion (ohne nachweisbare Bakteriämie) bis zum Tod innerhalb von 24 Stunden erfolgen. Um eine echte Beurteilung der systemischen Ausbreitung zu erhalten, sollte die Bakteriämie daher in kürzeren Intervallen (alle 6-12 Stunden) beobachtet werden. Ebenso kann sich der Krankheitsscore schnell ändern, insbesondere in den ersten 72 Stunden nach einer Koinfektion. Um die Krankheitssymptome genau zu verfolgen, ist es daher ratsam, die Mäuse dreimal täglich an den Tagen 1-3 nach der IAV-Infektion zu überwachen.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass dieses Modell die Bewegung von S. pneumoniae von einem asymptomatischen Kolonisator des Nasopharynx zu einem Erreger repliziert, der bei einer IAV-Infektion eine pulmonale und systemische Erkrankung verursachen kann. In diesem Modell löst IAV den Übergang von S. pneumoniae aus, indem es das bakterielle Verhalten im Nasopharynx modifiziert, die bakterielle Ausbreitung in die Lunge erhöht und die antibakterielle Immunität verändert23. In ähnlicher Weise stumpft die bakterielle Übertragung die antiviralen Immunantworten ab und beeinträchtigt die IAV-Clearance aus der Lunge23. Dies macht dieses Modell ideal für die Analyse von Veränderungen in der Immunantwort bei einzelnen und polymikrobiellen Infektionen. Darüber hinaus ist der Krankheitsverlauf nach einer Koinfektion zum Teil vom Pneumokokkenstamm im Nasen-Rachen-Raum abhängig. Daher eignet sich das Modell, um die bakteriellen Faktoren zu analysieren, die für die asymptomatische Besiedlung im Vergleich zur pathogenen Transition von S. pneumoniae erforderlich sind. Schließlich reproduziert dieses Modell die Anfälligkeit des Alterns für Koinfektionen, und obwohl dies hier nicht getestet wurde, kann es leicht verwendet werden, um den Einfluss des Wirtshintergrunds auf den Krankheitsverlauf zu beurteilen. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die Aufteilung von Übertragung und Krankheit in verschiedene Schritte die Möglichkeit bietet, die genetischen Varianten sowohl der Erreger als auch des Wirts zu analysieren, was eine detaillierte Untersuchung der Interaktionen eines wichtigen Pathobionten mit dem Wirt in verschiedenen Phasen des Krankheitsverlaufs ermöglicht. In Zukunft kann dieses Modell verwendet werden, um Behandlungsoptionen für gefährdete Wirte maßzuschneidern.
The authors have nothing to disclose.
Wir danken Nick Lenhard für die kritische Lektüre und Bearbeitung dieses Manuskripts. Wir möchten uns auch bei Andrew Camilli und Anthony Campagnari für die Bakterienstämme und Bruce Davidson für die Virusstämme bedanken. Diese Arbeit wurde unterstützt durch das National Institute of Health Grant (R21AG071268-01) an J.L. und das National Institute of Health Grants (R21AI145370-01A1), (R01AG068568-01A1), (R21AG071268-01) an E.N.B.G.
4-Aminobenzoic acid | Fisher | AAA1267318 | Mix I stock |
96-well round bottom plates | Greiner Bio-One | 650101 | |
100 µm Filters | Fisher | 07-201-432 | |
Adenine | Fisher | AC147440250 | Mix I stock |
Avicel | Fisher | 501785325 | Microcyrstalline cellulose |
BD Cytofix Fixation Buffer | Fisher | BDB554655 | Fixation Buffer |
BD Fortessa | Flow cytometer | ||
BD Intramedic Polyethylene Tubing | Fisher | 427410 | Tubing for nasal lavage |
BD Disposable Syringes with Luer-Lok Tips (1 mL) | Fisher | 14-823-30 | |
BD Microtainer Capillary Blood Collector and BD Microgard Closure | Fisher | 02-675-185 | Blood collection tubes |
Beta-Nicotinamide adenine dinucleotide | Fisher | AAJ6233703 | Mix IV stock |
Biotin | Fisher | AC230090010 | Vitamin stock |
C57BL/6J mice | The Jackson Laboratory | #000644 | Mice used in this study |
Calcium Chloride Anhydrous | Fisher Chemical | C77-500 | Mix I stock |
CD103 BV 421 | BD Bioscience | BDB562771 | Clone: M290 DF 1:200 |
CD11b APC | Invitrogen | 50-112-9622 | Clone: M1/70, DF 1:300 |
CD11c PE | BD Bioscience | BDB565592 | Clone: N418 DF 1:200 |
CD3 AF 488 | BD Bioscience | OB153030 | Clone: 145-2C11 DF 1:200 |
CD4 V450 | BD Horizon | BDB560470 | Clone: RM4.5 DF 1:300 |
CD45 APC eF-780 | BD Bioscience | 50-112-9642 | Clone: 30-F11 DF 1:200 |
CD45 PE | Invitrogen | 50-103-70 | Clone: 30-F11 DF 1:200 |
CD8α BV 650 | BD Horizon | BDB563234 | Clone: 53-6.7 DF 1:200 |
Choline chloride | Fisher | AC110290500 | Final supplement to CDM |
Corning Disposable Vacuum Filter/Storage Systems | Fisher | 09-761-107 | Filter sterilzation apparatus |
Corning Tissue Culture Treated T-25 Flasks | Fisher | 10-126-9 | |
Corning Costar Clear Multiple Well Plates | Fisher | 07-201-590 | |
Corning DMEM With L-Glutamine and 4.5 g/L Glucose; Without Sodium Pyruvate | Fisher | MT10017CM | |
Cyanocobalamin | Fisher | AC405925000 | Mix I stock |
D39 | National Collection of Type Culture (NCTC) | NCTC 7466 | Streptococcus pneumoniae strain |
D-Alanine | Fisher | AAA1023114 | Mix I stock |
D-Calcium pantothenate | Fisher | AC243301000 | Vitamin stock |
Dextrose | Fisher Chemical | D16-500 | Starter stock |
Dnase | Worthington Biochemical | LS002147 | |
Eagles Minimum Essential Medium | ATCC | 30-2003 | |
EDTA | VWR | BDH4616-500G | |
EF3030 | Center for Disease Control and Prevention | Available via the isolate bank request | Streptococcus pneumoniae strain, request using strain name |
F480 PE Cy7 | BD Bioscience | 50-112-9713 | Clone: BMB DF 1:200 |
Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes | Fisher | 14-432-22 | 50 mL round bottom tube |
Falcon Round-Bottom Polypropylene Test Tubes With Cap | Fisher | 14-959-11B | 15 mL round bottom tube |
Falcon Round-Bottom Polystyrene Test Tubes (5 mL) | Fisher | 14-959-5 | FACS tubes |
FBS | Thermofisher | 10437-028 | |
Ferric Nitrate Nonahydrate | Fisher | I110-100 | Mix III stock |
Fisherbrand Delicate Dissecting Scissors | Fisher | 08-951-5 | Instruments used for harvest |
Fisherbrand Disposable Inoculating Loops | Fisher | 22-363-602 | Inoculating loops |
Fisherbrand Dissecting Tissue Forceps | Fisher | 13-812-38 | Forceps for harvest |
Fisherbrand Premium Microcentrifuge Tubes: 1.5 mL | Fisher | 05-408-137 | Micocentrifuge tubes |
Fisherbrand Sterile Syringes for Single Use (10 mL) | Fisher | 14-955-459 | |
Folic Acid | Fisher | AC216630500 | Vitamin stock |
Gibco RPMI 1640 (ATCC) | Fisher | A1049101 | |
Gibco DPBS, no calcium, no magnesium | Fisher | 14190250 | |
Gibco HBSS, calcium, magnesium, no phenol red | Fisher | 14025134 | |
Gibco MEM (Temin's modification) (2x), no phenol red | Fisher | 11-935-046 | |
Gibco Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL) | Fisher | 15-140-122 | |
Gibco Trypan Blue Solution, 0.4% | Fisher | 15-250-061 | |
Gibco Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | Fisher | 25-200-056 | |
Glycerol (Certified ACS) | Fisher | G33-4 | |
Glycine | Fisher | AA3643530 | Amino acid stock |
Guanine | Fisher | AAA1202414 | Mix II stock |
Invitrogen UltraComp eBeads Compensation Beads | Fisher | 50-112-9040 | |
Iron (II) sulfate heptahydrate | Fisher | AAA1517836 | Mix III stock |
L-Alanine | Fisher | AAJ6027918 | Amino acid stock |
L-Arginine | Fisher | AAA1573814 | Amino acid stock |
L-Asparagine | Fisher | AAB2147322 | Amino acid stock |
L-Aspartic acid | Fisher | AAA1352022 | Amino acid stock |
L-Cysteine | Fisher | AAA1043518 | Amino acid stock |
L-Cysteine hydrochloride monohydrate | Fisher | AAA1038914 | Final supplement to CDM |
L-Cystine | Fisher | AAA1376218 | Amino acid stock |
L-Glutamic acid | Fisher | AC156211000 | Amino acid stock |
L-Glutamine | Fisher | O2956-100 | Amino acid stock |
L-Histidine | Fisher | AC166150250 | Amino acid stock |
LIFE TECHNOLOGIES LIVE/DEAD Fixable Blue Dead Cell Stain Kit, for UV excitation | Invitrogen | 50-112-1524 | Clone: N/A DF 1:500 |
L-Isoleucine | Fisher | AC166170250 | Amino acid stock |
L-Leucine | Fisher | BP385-100 | Amino acid stock |
L-Lysine | Fisher | AAJ6222514 | Amino acid stock |
L-Methionine | Fisher | AAA1031822 | Amino acid stock |
Low endotoxin BSA | Sigma Aldrich | A1470-10G | |
L-Phenylalanine | Fisher | AAA1323814 | Amino acid stock |
L-Proline | Fisher | AAA1019922 | Amino acid stock |
L-Serine | Fisher | AC132660250 | Amino acid stock |
L-Threonine | Fisher | AC138930250 | Amino acid stock |
L-Tryptophan | Fisher | AAA1023014 | Amino acid stock |
L-Valine | Fisher | AAA1272014 | Amino acid stock |
Ly6C BV 605 | BD Bioscience | BDB563011 | Clone: AL-21 DF 1:300 |
Ly6G AF 488 | Biolegend | NC1102120 | Clone: IA8, DF 1:300 |
Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells | American Type Culture Collection (ATCC) | CCL-34 | MDCK cell line for PFU analuysis |
Magnesium Sulfate 7-Hydrate | Fisher | 60-019-68 | CDM starter stock |
Manganese Sulfate | Fisher | M113-500 | Mix I stock |
MilQ water | Ultra-pure water | ||
Mouse Fc Block | BD Bioscience | BDB553142 | Clone: 2.4G2 DF 1:100 |
MWI VETERINARY PURALUBE VET OINTMENT | Fisher | NC1886507 | Eye lubricant for infection |
NCI-H292 mucoepidermoid carcinoma cell line | ATCC | CRL-1848 | H292 lung epithelial cell line for biofilm growth |
Niacinamide | Fisher | 18-604-792 | Vitamin stock |
NK 1.1 AF 700 | BD Bioscience | 50-112-4692 | Clone: PK136 DF 1:200 |
Oxyrase For Broth 50Ml Bottle 1/Pk | Fisher | 50-200-5299 | To remove oxygen from liquid cultures |
Paraformaldehyde 4% in PBS | Thermoscientific | J19932-K2 | |
Pivetal Isoflurane | Patterson Veterinary | 07-893-8440 | Isoflurane for anesthesia during infection |
Potassium Phosphate Dibasic | Fisher Chemical | P288-500 | Starter stock |
Potassium Phosphate Monobasic | Fisher Chemical | P285-500 | Starter stock |
Pyridoxal hydrochloride | Fisher | AC352710250 | Vitamin stock |
Pyridoxamine dihydrochloride | Fisher | AAJ6267906 | Mix I stock |
Riboflavin | Fisher | AC132350250 | Vitamin stock |
Sodium Acetate | VWR | 0530-500G | Starter stock |
Sodium Azide | Fisher Bioreagents | BP922I-500 | For FACS buffer |
Sodium Bicarbonate | Fisher Chemical | S233-500 | Starter stock and final supplement to CDM |
Sodium Phosphate Dibasic | Fisher Chemical | S374-500 | Starter stock |
Sodium Phosphate Monobasic | Fisher Chemical | S369-500 | Starter stock |
TCR APC | BD Bioscience | 50-112-8889 | Clone: GL-3 DF 1:200 |
TCRβ APC-Cy7 | BD Pharmigen | BDB560656 | Clone: H57-597 DF 1:200 |
Thermo Scientific Blood Agar with Gentamicin | Fisher | R01227 | Blood agar plates with the antibiotic gentamicin |
Thermo Scientific Trypsin, TPCK Treated | Fisher | PI20233 | |
Thiamine hydrochloride | Fisher | AC148991000 | Vitamin stock |
TIGR4 | ATCC | BAA-334 | Streptococcus pneumoniae strain |
Uracil | Fisher | AC157300250 | Mix II stock |
Worthington Biochemical Corporation Collagenase, Type 2, 1 g | Fisher | NC9693955 |