Um modelo de rato de pancreatite aguda grave é descrito aqui. O procedimento aqui apresentado é muito rápido, simples e acessível, permitindo, assim, potencialmente o estudo dos mecanismos moleculares e diferentes intervenções terapêuticas na pancreatite aguda de forma conveniente.
A prevalência de pancreatite aguda (AP), especialmente pancreatite aguda grave (SAP), está aumentando anualmente em faixas etárias mais jovens. No entanto, faltam tratamentos eficazes na prática clínica atual. Com a fácil acessibilidade das cepas transgênicas e eliminatórias e seu pequeno tamanho, que permite doses mínimas de medicamentos necessários para avaliação in vivo , um modelo experimental bem estabelecido em camundongos é preferido para a pesquisa ap. Além disso, a SAP induzida através de taurocholate de sódio (TC) é atualmente um dos modelos mais utilizados e caracterizados. Este modelo tem sido investigado para novas terapias e possíveis eventos moleculares durante o processo de AP. Aqui, apresentamos a geração de um modelo de mouse AP usando taurocholate de sódio e uma simples microsinga caseira. Além disso, também fornecemos a metodologia para a histologia subsequente e testes sorológicos.
Pancreatite aguda (AP) é uma inflamação aguda do pâncreas caracterizada pela obstrução do duto pancreático principal com distensão ductal subsequente e autogestão do pâncreas por suas enzimas anormalmente ativadas. Suas manifestações clínicas incluem inflamação local ou sistêmica, dor abdominal e elevação do amilase sérico1,2. De acordo com a classificação de gravidade3, a AP pode apresentar-se em formas leves, moderadas e graves, e entre elas, a pancreatite aguda grave (SAP) é a condição mais preocupante devido à sua alta taxa de mortalidade superior a 30%4. Nos Estados Unidos, a AP é uma das razões mais comuns para a internação, afetando mais de 200.000 pacientes5. Além disso, a AP, especialmente a SAP, está aumentando anualmente e afetando as faixas etárias mais jovens6. No entanto, faltam opções de tratamento eficazes na prática clínica atual6,7. Portanto, é necessário explorar os mecanismos moleculares envolvidos na AP, facilitando assim a melhoria do tratamento.
Modelos experimentais de animais bem estabelecidos são necessários para estudar os mecanismos envolvidos na AP e avaliar a eficácia de diferentes modalidades de tratamento. Com a fácil acessibilidade das cepas transgênicas e eliminatórias e seu pequeno tamanho, o que minimiza as doses de medicamentos necessários para avaliação in vivo, os camundongos são preferidos para a pesquisa ap. Portanto, vários modelos de AP foram desenvolvidos em camundongos8,9.
Trabalhando a partir de um modelo leve de rato de pancreatite induzido através da administração intravenosa de caerulein10, Niederau et al. desenvolveram um modelo de rato SAP apresentado com necrose celular acinar induzida usando a mesma droga e rota de injeção11. Embora este modelo possua várias vantagens, incluindo invasividade, indução rápida, reprodutibilidade ampla e aplicabilidade, a maior desvantagem é que apenas uma forma leve de AP é desenvolvida na maioria dos casos, limitando assim sua relevância clínica. O álcool é considerado um dos principais fatores etiológicos da AP; no entanto, Foitzik et al. relataram que causa lesão pancreática apenas quando combinado com outros fatores, como hiperestimulação exócrina12. Além disso, embora os modelos ap induzidos pelo álcool tenham sido desenvolvidos através de diferentes rotas de administração, e as doses de drogas tenham sido relatadas13,14,15, sua maior desvantagem é a dificuldade em reproduzi-los. A administração intraperitoneal de L-arginina também pode induzir AP em camundongos16; no entanto, sua baixa relevância clínica dificulta sua aplicação. Taurocholate, um sal bile, foi proposto pela primeira vez por Creutzfeld et al. em 1965 por induzir uma condição semelhante à AP humana através da infusão de ducto pancreático17. Embora existam controvérsias quanto à sua relevância clínica na fisiopatologia18,19, a pancreatite induzida por taurocolato continua sendo um modelo indispensável para a SAP.
Como este modelo é simples de perceber e também é eficaz em camundongos, é hoje um dos modelos AP mais utilizados para pequenos estudos in vivo. Perides et al. empregaram taurocholate de sódio (TC) para induzir SAP em camundongos20, fornecendo insights para entender sua patologia. Combinado com técnicas de modificação genética, este modelo nos permitiu confirmar vários genes específicos envolvidos na AP. Por exemplo, Bicozo et al. mostraram que um nocaute do gene CD38 protegeu contra um modelo de pancreatite de infusão TC e atribuiu os mecanismos a alterações na sinalização intracelular Ca2+21. Fanczal et al. investigaram a implicação fisiológica da expressão TRPM2 na membrana plasmática do acinar pancreático do rato e células ductais, e demonstraram gravidade reduzida da SAP induzida por TC em camundongos nocautes TRPM222. Além disso, este modelo também fornece uma maneira simples e eficaz de testar muitas drogas novas in vivo. Por exemplo, este método permitiu a validação dos efeitos terapêuticos da cafeína23, ácido desiddrocólico24, e vários antioxidantes e anticoagulantes25,26. Esta evidência demonstra a versatilidade do modelo SAP induzido por TC. Embora Wittel et al. tenham descrito um modelo semelhante de mouse27, a falta de detalhes sobre os procedimentos de implementação poderia resultar em uma incapacidade de reproduzir os achados. Neste artigo, focamos em métodos utilizando uma simples microsinga caseira e estudamos SAP induzida por TC, fornecendo assim uma possível orientação não apenas para um estudo mais aprofundado da patogênese e tratamento da AP, mas também para um método experimental perfeitamente adaptável para muitas outras substâncias.
O modelo SAP induzido pelo TC é uma excelente ferramenta de pesquisa. Como mostrado neste estudo, este modelo é muito facilmente realizado em laboratórios gerais sem empregar dispositivos específicos. Quando usado em combinação com histologia e análise bioquímica, fornece uma abordagem de custo (reagentes baratos) e economia de tempo (24h de janela de tempo) para induzir e avaliar AP. Ajustar a concentração de TC também oferece a possibilidade de produzir ap. Perides et al. também empregaram TC para induzir S…
The authors have nothing to disclose.
Somos gratos pelo apoio das seguintes bolsas: uma Bolsa de Pesquisa Translacional da NCRCH [2020WSA01], uma Bolsa Científica KJXW da Comissão de Saúde para Jovens Acadêmicos de Suzhou [KJXW2020002], um Plano de Ciência e Tecnologia da Cidade de Suzhou (SKY2021038 e SKJY2021050), uma bolsa do Programa Acadêmico Prioritário de Desenvolvimento das Instituições de Ensino Superior de Jiangsu (PAPD) e um Plano de Pesquisa Primária & Desenvolvimento Social da Província de Jiangsu (BE2018659).
0.5% iodophor | Shanghai Likang Disinfectant | 310102 | 4 mL/mouse |
0.9% sodium chloride | Sinopharm Group Co., Ltd. | 10019318 | 0.8 mL/mouse |
1% Pentobarbital sodium | Sigma | P3761 | 0.2 -0.25 mL/mouse |
25 μL flat tip Microliter syringe | Gaoge, Shanghai | A124019 | |
4% Paraformaldehyde | Beyotime, Nantong, China | P0099-500ml | |
5% sodium taurocholate (TC) | Aladdin | S100834-5g | 10 μL/SAP mouse |
6-0 Sterile nylon microsuture with threaded needle (1/2 circle) | Cheng-He | 20093 | |
75% alcohol | Sinopharm Group Co., Ltd. | 10009218 | 4 mL/mouse |
8-0 Sterile nylon microsuture with threaded needle (3/8 circle) | Cheng-He | 19064 | |
ALT Activity Assay Kit | EPNK, Anhui, China | ALT0012 | |
Amylase Assay Kit | EPNK, Anhui, China | AMY0012 | |
Angled small bulldog clamp with 12 mm jaw (3 cm) | Cheng-He | HC-X022 | |
aspen shavings or shreds for mouse bedding | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology | VR03015 | |
AST Activity Assay Kit | EPNK, Anhui, China | AST0012 | |
Blood Urea Nitrogen (BUN) Assay Kit | EPNK, Anhui, China | BUN0011 | |
C57BL/6 mouse | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology | 213 | |
Creatine Assay Kit | EPNK, Anhui, China | CRE0012 | |
Feature microtome blade | Beyotime, Nantong, China | E0994 | |
Hemostatic Forceps (9.5 cm, Curved) | JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd. | JC3901 | |
Lipase Assay Kit | Jiancheng, Nanjing, China | A054-2-1 | |
Microtome | Leica biosystem, Germany | RM2245 | |
Mindray biochemistry analyzer | Mindray, Shenzhen, China | BS-420 | |
MPO Assay Kit | Jiancheng, Nanjing, China | A044-1-1 | |
Normal mouse chow | Trophic, Nantong, China | LAD 1000 | |
Phosphate buffered saline | Beyotime, Nantong, China | C0221A | |
Straight micro-bulldog clamp with 5 mm jaw (1.5 cm) | JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd. | W40130 | |
Straight or curved forceps (11.0 cm) | Cheng-He | HC-X091A or HC-X090A | |
Straight Scissors (10.0 cm) | Cheng-He, Ningbo, China | HC-J039102 | |
Thermo Scientific Centrifuge | Thermo Scientific, USA | Multifuge X1R |