בהקשר הקליני, חולים עם סרטן הלבלב מקומי יעברו כריתת לבלב ואחריו טיפול אדג’ובנטי. פרוטוקול זה שדווח כאן נועד לבסס שיטה בטוחה ויעילה של מידול תרחיש קליני זה בעכברים עירומים, באמצעות השתלה אורתוטופית של סרטן הלבלב ואחריו כריתת לבלב דיסטלית וכריתת טבור.
קיים מחסור במודלים משביעי רצון של בעלי חיים לחקר טיפול אדג’ובנטי ו/או ניאו-ג’ובנטי בחולים הנחשבים לניתוח של סרטן הלבלב (PC). כדי לטפל במחסור זה, אנו מתארים מודל העכבר מעורבים השתלה אורתוטופית של המחשב ואחריו כריתת לבלב דיסטלי ו splenectomy. המודל הוכח כבטוח וגמיש כראוי לחקר גישות טיפוליות שונות בהגדרות אדג’ובנטיות וניאו-אדג’ובנטיות.
במודל זה, גידול בלבלב נוצר לראשונה על ידי השתלת תערובת של תאים סרטניים בלבלב האנושי (לוציפראז מתויג AsPC-1) וסרטן האדם הקשורים תאים כוכבי הלבלב לתוך הלבלב הדיסטלי של עכברי עירום Balb/c אתימי. לאחר שלושה שבועות, הסרטן הוא resected על ידי לפרוטומיה מחדש, כריתת לבלב דיסטלי ו splenectomy. במודל זה, הדמיה bioluminescence ניתן להשתמש כדי לעקוב אחר ההתקדמות של התפתחות סרטן והשפעות של כריתה / טיפולים. לאחר כריתה, ניתן לתת טיפול אדג’ובנטי. לחלופין, ניתן לתת טיפול ניאואדג’ובנטי לפני כריתה.
מוצגים נתונים מייצגים מ-45 עכברים. כל העכברים עברו כריתת לבלב דיסטלית מוצלחת / כריתת טבור ללא בעיות של עצירת דימום. שולי לבלב פרוקסימליים מקרוסקופיים הגדולים מ- 5 מ”מ הושגו ב- 43 (96%) עכברים. שיעור ההצלחה הטכנית של כריתת הלבלב היה 100%, עם 0% תמותה מוקדמת ותחלואה. אף אחת מהחיות לא מתה במהלך השבוע שלאחר כריתה.
לסיכום, אנו מתארים טכניקה חזקה הניתנת לשחזור עבור מודל כריתה כירורגית של סרטן הלבלב בעכברים המחקה את התרחיש הקליני. המודל עשוי להיות שימושי עבור בדיקות של טיפולים אדג’ובנטיים ו neoadjuvant.
אדנוקרצינומה צינורית הלבלב (סרטן הלבלב [PC]) קשורה פרוגנוזה עניים1. כריתה כירורגית נשאר הטיפול רק פוטנציאל מרפא עבור PC ויש לשקול עבור חולים המציגים עם מחלה בשלב מוקדם. למרבה הצער, אפילו עם כריתת R0 (כלומר, שולי כריתה ללא גידול), שיעור הישנות (מקומי או ממחלה גרורתית שלא זוהתה) הוא גבוה2,3. לכן, טיפול אדג’ובנטי מערכתי מצוין כמעט בכל החולים שעוברים כריתה4. יתר על כן, בעוד טיפול neoadjuvant מומלץ כעת רק עבור סרטן גבולי resectable, האינדיקציות שלה מתרחבים כך השימוש השגרתי שלה הוא המוקד של מחקר קליני רב5,6,7,8. על מנת לפתח גישות טיפוליות חדשניות עבור מחשב מעורב כריתה, גישות אלה צריך להיות מוערך תחילה במודלים פרה קליניים כי במדויק recapitulate הגדרות קליניות.
דגמי עכבר אורתוטופיים של PC שימשו לעתיםקרובותבעבר כדי לבדוק טיפולים תרופתיים 9,10. רבים מהם יוצרו על ידי הזרקת תאים סרטניים לבד לתוך הלבלב העכבר, וכתוצאה מכך גידולים חסרים סטרומה בולטת האופיינית למחשב. לאחרונה, מודלים אורתוטופיים בהזרקה משותפת, כגון זה שפיתחנו לראשונה על ידי הזרקת תערובת של מחשב אנושי ותאי כוכבי לבלב אנושיים (PSCs, היצרנים העיקריים של סטרומה קולגנית במחשב), נכנסו לשימוש קבוע11,12. הגידולים המיוצרים על ידי הזרקה משותפת כזו של סרטן ותאי סטרומה מציגים (i) הן את האלמנטים הסרטניים והן את המרכיב הסטרומלי האופייני (desmoplastic) של המחשב, ו – (ii) התפשטות תאים סרטניים משופרת גרורות11. לכן, מודל זה דומה מאוד למחשב אנושי. בעוד מספר מודלים כריתה של מחשב אורתוטופי תוארו13,14,15,16, אף אחד לא שיקף את המציאות הקלינית של כריתת הלבלב בבני אדם מדויק כמו מודל זה, ולכן היו suboptimal לבדיקת טיפולים אדג’ובנטי או neoadjuvant.
המטרות של מודל העכבר שהוצגו היו להדגים כיצד: (i) בהצלחה להשתיל סרטן הלבלב אורתוטופי תוך מזעור הפצה צפק בשוגג ו (ii) לאחר מכן לחלוטין resect הסרטן. הנייר מדגיש טיפים ומלכודות פוטנציאליות של טכניקה זו.
דגם עכבר אורתוטופי כריתה של סרטן הלבלב חשוב כי זה מאפשר בדיקה של טיפולים אדג’ובנטיים neoadjuvant. זה חשוב במיוחד בסרטן הלבלב שבו הניתוח נשאר הטיפול היעיל ביותר, אבל קשורה לסיכון גבוה להישנות. מאמר זה מתאר שיטה אשר תייצר באופן אמין סרטן הלבלב אשר פוטנציאל לריפוי עם כריתה, שכפול התרחיש הקליני שבו n…
The authors have nothing to disclose.
המחברים קיבלו תמיכה מהקרן לסרטן הלבלב אבנר.
Animals, Materials and Equipment for Implantation Procedure | |||
AsPC-1 human pancreatic cancer cell line, luciferase tagged (luc+ gene from Promega PGL3 Basic plasmid) | American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA | supplied by Professor Takashi Murakami, Saitama Medical University, Saitama, Japan | |
Autoclip wound clips, 9 mm | Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW, Australia | 500346 | |
Basic Dressing Pack | Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia | ||
Cancer associated human pancreatic stellate cells | Pancreatic Research Group cell bank | In house cell bank | |
Cryogenic tubes, 1.0 mL | Thermo Fisher Scientific Australia Pty Ltd, Scoresby, VIC, Australia | 366656 | |
Disposable stainless-steel scalpel blade with handle, size 15 | Livingstone International, Mascot, NSW, | SCP15 | |
Foetal bovine serum (FBS) | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 16000044 | |
Gilles fine tooth forceps 12 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Heated mats to maintain body temperature during surgery and postoperative recovery | Generic | ||
Homozygous athymic nude mice: Strain BALB/c-Fox1nu/Ausb, female | Australian Bioresources, Moss Vale, NSW, Australia | ||
Iscove's modified Dulbecco's medium (IMDM) with 4mM L-glutamine and no phenol red | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 21056023 | |
Jewellers forceps 11.5 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Micro needle holder (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Micro scissors (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Penicillin 10,000 U/mL, streptomycin 10,000 μg/mL | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 15140122 | |
Polyglycolic acid suture, size USP 5/0 on 13mm half-circle round-bodied needle | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | C1049407 | |
Portable weighing scale | Precision balances, Bradford, MA, USA | ||
Reflex clip applier and clip remover | World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA | 500345 | |
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 with phenol red and 300 mg/L Lglutamine | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 11875085 | |
Round bodied vessel dilator 15 cm, 0.1 mm tip | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Trypsin 0.05%, EDTA 0.02% | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 25300054 | For pancreatic stellate cells |
Trypsin 0.25%, EDTA 0.02% | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 25200056 | For ASPC-1 cells |
U-100 insulin syringes, 0.5 mL with 29 G (0.33 mm) × 13 mm needle | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD, USA | ||
Equipment for Resection Procedure | |||
Alm self-retaining retractor | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Autoclip wound clips 9 mm | Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW | 500346 | |
Basic Dressing Pack | Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia | 08-559NP | |
Disposable stainless-steel scalpel blade with handle, size 15 | Livingstone International, Mascot, NSW, | SCP15 | |
Gilles fine tooth forceps 12 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Hand-held high temperature fine tip cautery | Bovie Medical Corporation, Melville, NY, USA | AA01 | |
Heated mats to maintain body temperature during surgery and postoperative recovery | Generic | ||
IVIS Lumina II Bioluminescent Imaging Device | Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA | ||
Jewellers forceps 11.5 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Micro needle holder (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Micro scissors (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Polyglycolic acid suture, size USP 5/0 on 13mm half-circle round-bodied needle | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | C1049407 | |
Portable weighing scale | Precision balances, Bradford, MA, USA | ||
Reflex wound clip applier and clip remover | World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA | 500345 | |
Round bodied vessel dilator 15 cm, 0.1 mm tip | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Titanium “Weck style” Ligaclip, small | HZMIM, Hangzhou, China | ||
Titanium Ligaclip applier for open surgery, small | HZMIM, Hangzhou, China | ||
Volatile anaesthetic machine, including vapouriser and induction chamber | Generic | Generic vapouriser and induction chamber | |
Drugs for Procedures | |||
70% w/w ethanol solution | Sigma-Aldrich Pty Ltd, Castle Hill, NSW, Australia | Applied topically as surgical skin preparation | |
Buprenorphine 0.3 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 0.05 mg/kg s.c. | |
D-Luciferin (1 U/g) | PerkinElmer, Inc., Waltham, MA, USA | 122799 | diluted in PBS to 15 mg/mL. Dose: 150 mg/kg i.p |
Enrofloxacin 50 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 5 mg/kg s.c. | |
Flunixin 50 mg/mL | Norbrook Laboratories Australia, Tullamarine, VIC, Australia | Dose: 2.5 mg/kg s.c. | |
Isoflurane | Zoetis Australia Pty Ltd., Rhodes, NSW, Australia | Dose (vapourised with oxygen): 4% induction, 3% maintenance | |
Ketamine 100 mg/mL | Maylab, Slacks Creek, QLD, Australia | Dose: 80 mg/kg i.p. | |
Povidone-Iodine 10% w/v solution | Perrigo Australia, Balcatta, WA, Australia | RIO00802F | Applied topically to the anterior abdomen as surgical skin preparation |
Refresh eye ointment (liquid paraffin 42.5% w/w, soft white paraffin 57.3% w/w) | Allergan Australia Pty Ltd, Gordon, NSW, Australia | Applied to both eyes | |
Sodium chloride 0.9% w/v | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | 9481P | Dose: 900 μL s.c. |
Water for injections BP | Pfizer Australia, Sydney, NSW, Australia | For dilution of drugs | |
Xylazine 20 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 10 mg/kg i.p. |