Summary

Diseño de microparplots y preparación de muestras de plantas y suelos para 15 análisisde nitrógeno

Published: May 10, 2020
doi:

Summary

Se describe un diseño de microplot para la investigación de trazador de 15N para dar cabida a múltiples eventos de muestreo de plantas y suelos en temporada. Se presentan procedimientos de recolección y procesamiento de muestras de suelos y plantas, incluidos los protocolos de molienda y pesaje, para análisis de 15N.

Abstract

Muchos estudios de fertilizantes nitrogenados evalúan el efecto general de un tratamiento en mediciones de fin de temporada, como el rendimiento del grano o las pérdidas acumuladas de N. Un enfoque de isótopo estable es necesario para seguir y cuantificar el destino de la N derivada de fertilizantes (FDN) a través del sistema de cultivo del suelo. El propósito de este artículo es describir un diseño de investigación de pequeñas parcelas utilizando microtramas enriquecidas de 15N no confinadas para múltiples eventos de muestreo de suelos y plantas durante dos temporadas de cultivo y proporcionar protocolos de recolección, manipulación y procesamiento de muestras para un análisis total de 15N. Los métodos se demostraron utilizando un estudio replicado desde el centro-sur de Minnesota plantado en maíz (Zea mays L.). Cada tratamiento consistió en seis hileras de maíz (76 cm de 15,2 m de largo con una microplot (2,4 m por 3,8 m) incrustada en un extremo. La urea de grado fertilizante se aplicó a 135 kg de no ha-1 en la plantación, mientras que la microtrama recibió urea enriquecida a 5 átomos % 15N. Las muestras de suelo y plantas se tomaron varias veces a lo largo de la temporada de crecimiento, teniendo cuidado de minimizar la contaminación cruzada mediante el uso de herramientas separadas y separando físicamente las muestras no enriquecidas y enriquecidas durante todos los procedimientos. Las muestras de suelo y plantas se secaron, molieron para pasar a través de una pantalla de 2 mm, y luego se molieron a una consistencia similar a la harina utilizando un molino de tarro de rodillos. Los estudios de trazador requieren planificación adicional, tiempo de procesamiento de muestras y mano de obra manual, e incurren en costos más altos para materiales enriquecidos de 15N y análisis de muestras que los estudios N tradicionales. Sin embargo, utilizando el enfoque de balance de masas, los estudios de trazador con múltiples eventos de muestreo en temporada permiten al investigador estimar la distribución de FDN a través del sistema de cultivos de suelo y estimar el FDN no contabilizado del sistema.

Introduction

El uso de nitrógeno fertilizante (N) es esencial en la agricultura para satisfacer las demandas de alimentos, fibra, piensos y combustibles de una creciente población mundial, pero las pérdidas de N de los campos agrícolas pueden afectar negativamente la calidad ambiental. Debido a que N sufre muchas transformaciones en el sistema de cultivo de suelo, una mejor comprensión del ciclo N, la utilización de los cultivos y el destino general del fertilizante N son necesarios para mejorar las prácticas de gestión que promueven la eficiencia del uso de N y minimizan las pérdidas ambientales. Los estudios tradicionales de fertilizantes N se centran principalmente en el efecto de un tratamiento en las mediciones de fin de temporada, como el rendimiento de los cultivos, la absorción de N cultivos en relación con la tasa N aplicada (eficiencia aparente del uso de fertilizantes) y el suelo residual N. Si bien estos estudios cuantifican los insumos, salidas y eficiencias del sistema general N, no pueden identificar ni cuantificar N en el sistema de cultivos del suelo derivado de fuentes de fertilizantes o del suelo. Se debe utilizar un enfoque diferente utilizando isótopos estables para rastrear y cuantificar el destino de la N derivada de fertilizantes (FDN) en el sistema de cultivos del suelo.

El nitrógeno tiene dos isótopos estables, 14N y 15N, que se producen en la naturaleza a una proporción relativamente constante de 272:1 para 14N/15N1 (concentración de 0,366 átomos % 15N o 3600 ppm 15N2,3). La adición de fertilizante enriquecido de 15N aumenta el contenido total de 15N del sistema del suelo. Como 15N enriquecido fertilizante se mezcla con suelo no enriquecido N, el cambio medido de 14N /15N relación permite a los investigadores trazar FDN en el perfil del suelo y en el cultivo3,,4. Un balance de masa se puede calcular midiendo la cantidad total de 15N de trazador en el sistema y cada una de sus partes2. Debido a que los fertilizantes enriquecidos de 15N son significativamente más caros que los fertilizantes convencionales, las microtramas enriquecidas de 15N a menudo se incrustan dentro de las parcelas de tratamiento. El propósito de este documento de métodos es describir un diseño de investigación de pequeña parcela utilizando microtramas para múltiples eventos de muestreo de suelos y plantas en temporada para maíz (Zea mays L.) y presentar protocolos para la preparación de muestras de plantas y suelos para el análisis total de 15N. Estos resultados se pueden utilizar para estimar la eficiencia del uso de fertilizantes N y crear un presupuesto N parcial que tenga en cuenta el FDN en el suelo a granel y el cultivo.

Protocol

1. Descripción del sitio de campo NOTA: Al realizar ensayos de campo de trazador de 15N, los sitios seleccionados deben minimizar la variación debido al suelo, la topografía y las características físicas5. La contaminación cruzada puede producirse después del movimiento lateral del suelo debido a la pendiente, el viento o la translocación del agua, o la labranza, mientras que la distribución vertical del suelo N puede verse afectada por el flujo de agu…

Representative Results

Los resultados presentados en este artículo provienen de un sitio de campo establecido en 2015 en el Centro de Divulgación e Investigación del Sur de la Universidad de Minnesota ubicado cerca de Waseca, MN. El sitio fue administrado como una rotación de maíz-soja[Glycine max (L.) Merr] antes de 2015, pero fue manejado como una rotación de maíz y maíz durante las temporadas de cultivo de 2015 y 2016. El suelo era un loam arcilloso Nicollet (fino-loamy, mezclado, superactiv…

Discussion

La investigación estable de isótopos es una herramienta útil para rastrear y cuantificar FDN a través del sistema de cultivos de suelo. Sin embargo, hay tres supuestos principales asociados con los estudios de trazador N que si se violan pueden invalidar las conclusiones extraídas del uso de esta metodología. Son 1) el trazador se distribuye uniformemente por todo el sistema, 2) los procesos bajo el estudio se producen a las mismas tasas, y 3) N dejando el pool enriquecido 15N no devuelve<sup class="xref…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Los autores reconocen el apoyo del Minnesota Corn Research & Promotion Council, la Hueg-Harrison Fellowship y la Minnesota’s Discovery, Research and InnoVation Economy (MnDRIVE).

Materials

20 mL scintillation vial ANY; Fisher Scientific is one example 0334172C
250 mL borosilicate glass bottle QORPAK 264047
48-well plate EA Consumables E2063
96-well plate EA Consumables E2079
Cloth parts bag (30×50 cm) ANY NA For corn ears
CO2 Backpack Sprayer ANY; Bellspray Inc is one example Model T
Coin envelop (6.4×10.8 cm) ANY; ULINE is one example S-6285 For 2-mm ground plant samples
Corn chipper ANY; DR Chipper Shredder is one example SKU:CS23030BMN0 For chipping corn biomass
Corn seed ANY NA Hybrid appropriate to the region
Disposable shoe cover ANY; Boardwalk is one example BWK00031L
Ethanol 200 Proof ANY; Decon Laboratories Inc. is one example 2701TP
Fabric bags with drawstring (90×60 cm) ANY NA For plant sample collection
Fertilizer Urea (46-0-0) ANY NA ~0.366 atom % 15N
Hand rake ANY; Fastenal Company is one example 5098-63-107
Hand sickle ANY; Home Depot is one example NJP150 For plant sample collection
Hand-held soil probe ANY; AMS is one example 401.01
Hydraulic soil probe ANY; Giddings is one example GSPS
Hydrochloric acid, 12N Ricca Chemical R37800001A
Jar mill ANY; Cole-Parmer is one example SI-04172-50
Laboratory Mill Perten 3610 For grinding grain
Microbalance accurate to four decimal places ANY; Mettler Toledo is one example XPR2
N95 Particulate Filtering Facepiece Respirator ANY, ULINE is one example S-9632
Neoprene or butyl rubber gloves ANY NA For working in HCl acid bath
Paper hardware bags (13.3×8.7×27.8 cm) ANY; ULINE is one example S-8530 For soil samples and corn grain
Plant grinder ANY; Thomas Wiley Model 4 Mill is one example 1188Y47-TS For grinding chipped corn biomass to 2-mm particles
Plastic tags ULINE S-5544Y-PW For labeling fabric bags and microplot stalk bundles
Sodium hydroxide pellets, ACS Spectrum Chemical SPCM-S1295-07
Soil grinder ANY; AGVISE stainless steel grinder with motor is one example NA For grinding soil to pass through a 2-mm sieve
Tin capsule 5×9 mm Costech Analytical Technologies Inc. 041061
Tin capsule 9×10 mm Costech Analytical Technologies Inc. 041073
Urea (46-0-0) MilliporeSigma 490970 10 atom % 15N

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Cite This Article
Spackman, J. A., Fernandez, F. G. Microplot Design and Plant and Soil Sample Preparation for 15Nitrogen Analysis. J. Vis. Exp. (159), e61191, doi:10.3791/61191 (2020).

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