通过质谱成像对 萨利克斯阿尔巴 叶中异种生物代谢的调查
Summary
这种方法使用质谱成像（MSI）来了解在接触异种生物时 ，S.阿尔巴 叶的代谢过程。该方法允许在特定、完整的组织内对感兴趣的化合物及其预测的代谢物进行空间定位。
Abstract
所介绍的方法使用质谱成像（MSI）来建立 S.阿尔巴 叶在接触异种生物时的代谢轮廓。使用非靶向方法，在植物组织中识别和本地化感兴趣的植物代谢物和异种生物，以发现特定的分布模式。然后，在从已识别的异种生物中预测潜在的代谢物（即代谢物和结合物）。当异生物代谢物位于组织中时，记录植物改变其所涉及的酶类型。这些结果用于描述在 S.alba 叶中发生的不同类型的生物反应，以回应叶子中的异生物积累。代谢物在两代人中预测，允许记录连续的生物反应，以改变叶组织中的异种生物。
Introduction
由于人类活动，异种生物在世界各地广泛分布。其中一些化合物是水溶性，并被土壤1吸收，并进入食物链时，他们积累在植物组织2，3，4。这些植物被昆虫和食草动物吃掉，它们是其他生物的猎物。一些异种生物的摄入及其对植物健康的影响被描述为5，6，7，8，但最近才在组织水平9。因此，目前还不清楚异种生物代谢发生于何处或如何发生，或者特定植物代谢物是否与特定组织中的异生物积累相关。此外，大多数研究忽视了植物中异种生物及其代谢物的新陈代谢，因此对植物组织中的这些反应知之甚少。
这里建议的是一种研究生物样本中的酶反应的方法，该反应可以与基质和反应产品的组织定位相关。该方法可以在一个实验中绘制生物样本的完整代谢剖面，因为分析是无针对性的，并且可以使用感兴趣的定制分析列表进行调查。提供的是在原始数据集中跟踪的候选人列表。如果在样本中注意到一个或几个感兴趣的分析，特定的组织定位可以提供有关相关生物过程的重要信息。然后，利用相关的生物定律在硅中修改感兴趣的分析，以寻找可能的产品/代谢物。然后，通过识别所涉及的酶并本地化组织中的反应来分析原始数据，从而帮助了解发生的代谢过程。没有其他方法提供生物样本中发生的反应类型、感兴趣化合物的本地化及其相关代谢物的信息。一旦有新鲜和完整的组织，并且感兴趣的化合物可以电解，这种方法可用于任何类型的生物材料。拟议的议定书发表在《维莱特》等12 期中，详见此处供科学界使用。
Protocol
Representative Results
Discussion
此协议的关键部分是样品准备：样品必须柔软且完好无损。切割是最困难的部分，因为样品的温度和厚度可能因所研究的样品类型而异。动物组织通常是同质的，更容易切割。植物样本通常包含不同的结构，因此由于刀片遇到软、硬或空血管组织，因此更难保持完好无损。强烈建议在与植物样本一起工作时使用新鲜组织，以避免在亲水组织中形成冰并破坏冰。切片存放在 ITO 涂层滑梯上时，必须?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢查尔斯·皮诺、梅兰妮·拉加里格和雷吉斯·拉维涅在植物样本的MALDI成像样品准备方面的技巧和技巧。
Materials
| Cover slips | Bruker Daltonics | 267942 | |
| Cryomicrotome | Thermo Scientific | ||
| Excel | Microsoft corporation | ||
| flexImaging | Bruker Daltonics | ||
| ftmsControl | Bruker Daltonics | ||
| GTX primescan | GX Microscopes | ||
| HCCA MALDI matrix | Bruker Daltonics | 8201344 | |
| ImagePrep | Bruker Daltonics | ||
| ITO-coated slides | Bruker Daltonics | 237001 | |
| M1-embedding matrix | ThermoScientific | 1310 | |
| Metabolite Predict | Bruker Daltonics | ||
| Metaboscape | Bruker Daltonics | ||
| Methanol | Fisher Chemicals | No specific reference needed | |
| MX 35 Ultra blades | Thermo Scientific | 15835682 | |
| Plastic molds | No specific reference needed | ||
| SCiLS Lab | Bruker Daltonics | ||
| SolariX XR 7Tesla | Bruker Daltonics | The method proposed is not limited to this instrument | |
| Spray sheets for ImagePrep | Bruker Daltonics | 8261614 | |
| TFA | Sigma Aldrich | No specific reference needed |
References
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