Mevcut çalışmada geliştirilen akut karaciğer yetmezliği hayvan modeli potansiyel tedavilerin incelenmesi için uygun bir alternatif sunuyor. Mevcut model, fiziksel ve ilaca bağlı hepatik yaralanmanın kombine etkisini kullanır ve yeni tedavilerin potansiyelini incelemek için uygun bir zaman penceresi sağlar.
Akut karaciğer yetmezliği (ALF), karaciğerin metabolik, biyokimyasal, sentezleme ve detoksifiye fonksiyonlarının kaybına neden olan çeşitli etiyolojilerin neden olduğu klinik bir durumdur. Çoğu geri dönüşümsüz karaciğer hasarı durumlarda, ortotropik karaciğer nakli (OLT) mevcut tek tedavi kalır. ALF için bir tedavinin tedavi potansiyelini incelemek için, ALF bir hayvan modeli nde önceki test esastır. Mevcut çalışmada sıçanlarda ALF modeli %70 parsiyel hepatektomi (PHx) ve 48 saat tedavi penceresi sağlayan asetaminofen (APAP) enjeksiyonları birleştirilerek geliştirilmiştir. Karaciğerin ortanca ve sol lateral lobları karaciğer kitlesinin %70’ini çıkarmak için çıkarıldı ve APAP’a 2 gün boyunca ameliyat sonrası 24 saat verildi. ALF’ye bağlı hayvanlarda sağkalımda ciddi azalma saptandı. ALF gelişimi alanin amino transferaz (ALT), aspartat amino transferaz (AST), alkalen fosfataz (ALP) enzimlerinin değiştirilmiş serum düzeyleri ile doğrulandı; protrombin zaman değişiklikleri (PT); ve uluslararası normalleştirilmiş oranın (INR) değerlendirilmesi. QPCR ile gen ekspresyonu profilinin incelenmesi, apoptoz, inflamasyon ve karaciğer hasarının ilerlemesinde yer alan genlerin ekspresyon düzeylerinde artış olduğunu ortaya koymuştur. Histolojik değerlendirme ile hepatositlerin diffüz dejenerasyonu ve immün hücrelerin infiltrasyonu gözlendi. AlF’nin geri döndürülemeoranı, sinjenezik sağlıklı sıçan hepatositlerinin intrasplenik transplantasyonu ndan sonra ALT, AST ve ALP’in sağkalım ve serum düzeylerinin restorasyonu ile doğrulandı. Bu model, ALF’nin patofizyolojisini incelemek ve ALF için yeni bir tedavinin potansiyelini değerlendirmek için mevcut ALF hayvan modellerine güvenilir bir alternatif sunmaktadır. İki farklı yaklaşımın kullanımı da fiziksel ve ilaca bağlı karaciğer hasarının kombine etkisini incelemek mümkün kılar. Mevcut yordamın tekrarlanabilirliği ve fizibilitesi modelin ek bir yararıdır.
Akut karaciğer yetmezliği (ALF) Amerikan Derneği Karaciğer Hastalıkları Çalışma için herhangi bir hasar belirti olmadan akut karaciğer hasarının hızlı gelişimi olarak tanımlanır ve karaciğer ciddi bozulma ile karakterizedir, metabolik, ve karaciğer detoksifiye fonksiyonları1. ALF, uzun bir süre boyunca neden olduğu karaciğer hasarı ve ani karaciğer hasarı kronik karaciğerhastalıkları2 ,3,4sonucu gerçekleşir akut kronik karaciğer yetmezliği (ACLF), oluşur kronik karaciğer yetmezliği farklıdır . ALF için mevcut tek tedavi ortotopik karaciğer nakli (OLT), ya da ölüm oluşabilir. Karaciğer donör sıkıntısı nedeniyle, ALF muzdarip hastalarda mortalite oranı çok yüksektir.
Alternatif terapötik yaklaşımların potansiyelini incelemek ve ALF’nin patofizyolojisini daha iyi anlamak için, insanlarda meydana gelen ALF’yi yansıtabilen hayvan modellerine ihtiyaç vardır. Zaten mevcut ALF hayvan modellerinin çoğu birkaç eksiklikleri var. Asetaminofen (APAP) etkileri nin çoğaltılması zordur ancak temporal, klinik, biyokimyasal ve patolojik parametreler açısından en yakın benzerliklere sahiptir. APAP kaynaklı hayvan modelleri sık sık APAP ve ara5,6,7hemoglobin oksidasyonu nedeniyle methemoglobine varlığı nedeniyle sorunlarla karşılaşır. Başka bir sorun öngörülemeyen doz yanıtları ve ölüm saati yansıyan tekrarlanabilirlik eksikliğidir. Karbon tetra klorür (CCl4)kullanılarak üretilen ALF hayvan modelleri8,9,10,11′de düşük tekrarlanabilirlik vardır. Konkavalin A (Con A) ve lipoplysaccharide (LPS) indüklenen ALF hayvan modelleri insan hastalığının klinik modelini yansıtmaz, onlar otoimmün karaciğer hastalıkları ve sepsis çalışmada sırasıyla dahil hücresel mekanizmaların çalışmada avantajları olmasına rağmen12,13,14,15. Benzer şekilde, tiyoacetamide (TAA) da aktif bir metabolit tiyoacetamide sülfoksit biyotransformasyon gerektirir ve türlerin varyasyongösterir 16,17,18,19. D-galaktosamin (D-Gal) bazı biyokimyasal üretir, metabolik, ve fizyolojik değişiklikler ALF benzer ama tüm ALF patolojik durumu yansıtmak mümkün değildir20,21,22,23. Daha iyi bir şekilde ALF sendromu yansıtmak mümkün bir ALF modeli geliştirmek için bu yöntemlerin iki veya daha fazla birleştirmek için çok az girişimleri olmuştur13. Bu nedenle, daha fazla çalışma hastalık parametrelerini yansıtabilir bir model geliştirmek için gereklidir, daha iyi tekrarlanabilirlik vardır, ve terapötik bir müdahalenin etkilerini incelemek için yeterli zaman sağlar.
Mevcut çalışmada, sıçanlarda alternatif bir ALF modeli parsiyel hepatektomi (PHx) ve hepatotoksik reaktifin daha düşük dozlarda etkileri birleştirilerek oluşturulmuştur. APAP karaciğer hasarına neden iyi kurulmuş bir role sahiptir5,24,25. Yaygın olarak kullanılan bir analjeziktir ve toksik metabolitler oluşturarak supratherapeutic dozlarda karaciğer için toksiktir. APAP gelişmiş ülkelerde birçok ölüm nedenidir. Kısmi hepatektominin neden olduğu fiziksel yaralanma, inflamasyonla ilgili çeşitli süreçlerin aktivasyonunun yanı sıra karaciğer rejenerasyonunu da başlatır. Hepatotoksik ajan APAP enjeksiyonu karaciğerde düşmanca bir ortama neden olur, hepatositlerin çoğalmasını önler. Bu hayvan üzerindeki stres süresini azaltır, hangi hepatotoksin daha küçük dozlarda ile kombine edildiğinde, prosedürün daha iyi tekrarlanabilirlik yol açar. Bu nedenle, bu model kullanılarak, karaciğer yaralanmaları iki tür bir kombinator etkisi çalışılmıştır. Geliştirilen ALF hayvan modelini karakterize etmek için fizyolojik ve biyokimyasal parametreler incelenmiştir. AlF’nin başarılı geri dönüşü sinjenezik sağlıklı sıçan hepatositlerinin transplantasyonu ile doğrulandı.
ALF için uygun bir hayvan modelinin geliştirilmesi patogenezin daha iyi anlaşılması ve ALF’nin ilerlemesi için çok önemlidir. Iyi karakterize ALF hayvan modeli de alf karşı yeni terapötik yaklaşımların geliştirilmesi ve deneme için fırsat sağlar. Birçokgirişimalf6,12, 21,23,46,47,<sup class="xre…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma Biyoteknoloji Bölümü, Hindistan Hükümeti Ulusal İmmünoloji Enstitüsü, Yeni Delhi alınan çekirdek hibe tarafından desteklenmiştir.
Acetaminophen (Biocetamol) | EG Pharmaceuticals | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Alkaline Phosphatase Kit (DEA) | Coral Clinical System, India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Automated analyser | Tulip, Alto Santracruz, India | Screen Maaster 3000 | Biochemical analyser for liver functional test |
Betadine (Povidon-Iodine Solution) | Win-Medicare; India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Biological safety cabinet (Class I) | Kartos international; India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Bright Field Microscope | Olympus, Japan | LX51 | |
Cefotaxime (Taxim®) | AlKem; India | cefotaxime sodium injection, No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Cell Strainer | Sigma; US | CLS431752 | |
Collagenase Type I | Gibco by Life Technologies | 17100-017 | |
Cotton Buds | Pure Swabs Pvt Ltd; India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Drape Sheet | JSD Surgicals, Delhi, India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
DPX Mountant | Sigma; US | 6522 | |
Eosin Y solution, alcoholic | Sigma; US | HT110132 | |
Forceps | Major Surgicals; India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Gas Anesthesia System | Ugo Basile; Italy | 211000 | |
Glucose | Himedia, India | GRM077 | |
Hair removing cream (Veet®) | Reckitt Benckiser, India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Hematoxylin Solution, Mayer's | Sigma; US | MHS16 | |
Heparin sodium salt | Himedia; India | RM554 | |
Hyaluronidase From Sheep Testes | Sigma; US | H6254 | |
I.V. Cannula (Plusflon) | Mediplus, India | Ref 1732411420 | |
Insulin Syringes | BD; US | REF 303060 | |
Isoflurane (Forane®) | Asecia Queenborough | No B506 | Inhalation Anaesthetic |
Ketamine (Ketamax®) | Troikaa Pharmaceuticals Ltd. | Ketamine hydrochloride IP, No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Meloxicam (Melonex®) | Intas Pharmaceuticals Ltd; India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Micro needle holders straight & curved |
Mercian; England | BS-13-8 | |
Micro needle holders straight & curved |
Mercian; England | BS-13-8 | |
Microtome | Histo-Line Laboratories, Italy | MRS3500 | |
Nylon Thread | Mighty; India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Paraformaldehyde | Himedia; India | GRM 3660 | |
Percoll® | GE Healthcare | 17-0891-01 | |
Refresh Tears/Eyemist Gel | Allergan India Private Limited/Sun Pharma, India | P3060 | No specific Catalog Number |
RPMI | Himedia; India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Scalpel | Major Surgicals; India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Scissors | Major Surgicals; India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
SGOT (ASAT) KIT | Coral Clinical System, India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
SGPT (ALAT) KIT | Coral Clinical System, India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Shandon Cryotome E Cryostat | Thermo Electron Corporation; US | No specific Catalog Number | |
Sucrose | Sigma; US | S0389 | |
Surgical Blade No. 22 | La Medcare, India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Surgical Board | Locally made | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Surgical White Tape | 3M India; India | 1530-1 | Micropore Surgical Tape |
Sutures | Ethicon, Johnson & Johnson, India | NW 5047 | |
Syringes (1ml, 26 G) | Dispo Van; India | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
Trimmer (Clipper) | Philips | NL9206AD-4 DRACHTEN QT9005 | |
Weighing Machine | Braun | No specific Catalog Number (Local Procurement) | |
William's E Media | Himedia; India | AT125 | |
Xylazine (Xylaxin®) | Indian Immunologicals Limited | Sedative, Pre-Anaesthetic, Analgesic and muscle relaxant |