ApoE– / – fareler aldosteron sürekli bir sürüm boyunca aterojenik bir diyet ile beslenen aort kökünde ateroskleroz ikna etmek için bir protokol açıklar. Plak kompozisyon karakterize yöntemleri de açıklanmaktadır.
Ateroskleroz nedeniyle kronik inflamatuar yanıt vasküler endotel etkileyen ve hipertansiyon, dislipidemi ve diyabet gibi çeşitli faktörler tarafından yükseltilir. Bugüne kadar kardiyovasküler hastalık gelişimi için bir risk faktörü olarak aldosteron dolaşan bir rol destekleyecek kanıt vardır. Transgenik fare modelleri ateroskleroz için önde gelen hücresel ve moleküler süreçleri çalışmaya üretilmedi. Bu el yazması ApoE– / – farelerde aldosteron sürekli infüzyon yararlanır ve aterosklerotik plaklar aortik kökü tedavisi 4 hafta sonra oluşturur bir iletişim kuralını tanımlar. Biz, bu nedenle, miktar ve aortik kök düzeyinde aterosklerotik lezyonların karakterizasyonu için bir yöntem gösterilmektedir. Aldosteron infüzyon katma değeri aterosklerotik lezyonları lipid ve inflamatuar hücre zengin nesil tedavi 4 hafta sonra gösterilir. Plak lipid ve makrofaj içeriğinde ölçmek için boyama yordamlarda ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. Özellikle, bu protokol için kalp kalp doku antigenicity korumak ve algılama antijenleri ilgi kolaylaştırmak amacıyla Ekim doku gömme gerçekleştiriyoruz. Plak fenotip analizini ateroskleroz gelişiminin patofizyolojisi çalışma ve anti-aterojenik uyuşturucu gelişimi için roman farmakolojik hedefleri belirlemek için geçerli bir yaklaşım temsil eder.
Ateroskleroz mortalite ve morbidite dünya çapında1ana nedenlerinden biridir. Lipidler ve aterosklerotik plak oluşumunu belirleyen lökositler tarafından kan damarları nerede sızmış bir kronik inflamatuar durumu ile karakterizedir. Akut kalp olaylar çoğunluğu plak yırtılması nedeniyle trombotik olaylar ile ilişkilidir. Plak rüptürü eğilimli “hassas” tanımlanır ve pro-inflamatuar lökosit, nekrotik bir çekirdek ve ince lifli kap2artan infiltrasyonu ile karakterizedir. Son yıllarda, klinik ve deneysel çalışmalar hastalığın karmaşık patofizyolojisi açıklık var. Birkaç hayvan modeli moleküler mekanizmaları ateroskleroz3indüksiyon içinde yer alan araştırmak için kullanılır. Şu anda, fare ile karşılaştırıldığında insanlar onun patofizyolojisi mevcut species-specific bazı farklılıklara rağmen ateroskleroz eğitim için en sık kullanılan türdür. İnsanlarda kolesterol dolaşan ağırlıklı düşük yoğunluklu lipoproteinler (LDL), taşınır iken özellikle kolesterol dolaşan esas olarak yüksek yoğunluklu lipoproteinler (ile antiatherogenic özellikleri) tarafından fare modellerinde, muhtemelen oluşur Neden vahşi tipi fareler spontan ateroskleroz4geliştirmek mi ana nedeni temsil eden. Oysa insanlar yaklaşık % 50’sini diyet kolesterol4absorbe Ayrıca, farelerde vahşi tip kolesterol diyet, emici için genellikle dayanıklıdır. Bu sınırlamalarını aşmak için birkaç genetiği değiştirilmiş fare modelleri üretilmedi. Apolipoprotein E-eksik fare (ApoE−/−) ve LDL reseptör-eksik fare (LDLr−/−) yaygın olarak kullanılmaktadır. Yüksek yağ yüksek kolesterol diyet, hızla LDLr−/−farelere göre daha fazla plak ApoE−/− fareler geliştirmek ve bu nedenle, apolipoprotein−/− fareler kullanmaktır LDLr−/−fareler5,6bundan daha yaygın. ApoE−/− fare lezyonlar ateroskleroz herhangi bir aşamada geliştirmek ve her ne kadar fare plaklar bir kararsız fenotip7gösterme bu insanlarda gözlenen karşılaştırılabilir vardır. Genel olarak, apolipoprotein−/− fareler kendiliğinden ateroskleroz geliştirmek ve bu işlem ile Batı diyet3hızlandırılır. Ateroskleroz şiddeti karotis, akciğer, femur ve brachiocephalic arter ve aortik kök6düzeyinde değerlendirilebilir. Özellikle, aortik kökü bir anatomik site farelerde aterosklerotik lezyonları geliştirmek eğilimli temsil eder. Bu nedenle, bu bölgedeki aterosklerotik plak oluşumunu değerlendirmek için yaygın bir uygulama olduğunu.
Çeşitli çalışmalarda bu aldosteron ateroskleroz8,9,10gelişiminde karıştığı göstermiştir. Aldosteron infüzyon aterojenik bir diyet beslenen ApoE−/− farelerde aortik kök aterosklerotik lezyonlar iltihaplı ve lipid-zengin plak oluşumu10inducing gelişimini hızlandırır.
Özetle, aldosteron infüzyon, beslenme, kalp dokuları, miktar ve karakterizasyonu aterosklerotik lezyonların ApoE– / – farelerde katılmasını aterojenik diyet dahil olmak üzere bir protokolü açıklar. Bu yordam iltihaplı, lipid zengini aterosklerotik plaklar verimli bir oluşumu teşvik ve atherogenesis incelenmesi için değerli bir model temsil eder.
Ateroskleroz, makrofajlar, T-lenfositleri, endotel hücreleri ve düz kas hücreleri1gibi birden çok hücre tipleri arasındaki etkileşimler içeren büyük ve orta damarları ile ilgili kronik bir enflamatuar hastalığıdır. Fare aterojenik modelleri sınırlamaları rağmen aterosklerotik süreç kanıtlara büyük gövdeli mevcuttur. Bu modeller hızla belirli yaş ve cinsiyet deneysel tabur üreten avantajı var. Fareler de tanımlanmış ve homojen bir genetik arka planı göster.
<p …The authors have nothing to disclose.
Bu eser İtalyan Sağlık Bakanlığı (Ricerca Corrente, GR-2009-1594563 ve PE-2011-02347070 M.C. için) gelen hibe tarafından desteklenmiştir
Adjusted calories diet (42 % from fat) | Envigo | TD.88137 | atherogenic diet |
Osmotic minipump with filling tube | Alzet | model 1004 | for continous realase |
Aldosterone | SIGMA | A9477 | hormone |
Ethanol | SIGMA | 34852-M | solvent |
Alchol Preps saturated with 70 % Isopropyl Alcohol | Kendal Webcol | 6818 | Disinfectant |
Surgery wire (Vicryl 6.0) | Demas | 500004 | surgery |
10% Povidone/iodine ointment | Aplicare-Meriden | 52380-0026-1 | Antiseptic |
Formalin 10% | SIGMA | HT5012 | to fix vascolature |
Cryomold | Bio-Optica | 07-MP1515 | for embedding |
O.C.T. Compound | Sakura Finetek | 4583 | for embedding |
Cryostat | Leica | CM1900 | instrument for sectioning |
Dulbecco's Phosphat Buffered Saline | Aurogene | AU-L0615-500 | buffer solution |
Adhesion Slides Polysine | VWR | 631-0107 | microscope glasses |
Cover Glasses | Bio-Optica | 72015 | cover glasses |
Formaldehyde 37% | SIGMA | 252549 | solvent |
Oil Red O solution (0.5 % in isopropanol) | SIGMA | O1391 | staining solution |
Mayer’s Hematoxylin | SIGMA | MHS32 | staining solution |
Lithium Carbonate | SIGMA | 62470 | washing buffer |
Acqueous Mounting Medium | Thermo Scientific | TA-125-AM | mounting solution |
Acetone | SIGMA | 179124 | solvent |
Phosphomolybdic acid solution | SIGMA | HT153 | for hystology |
Direct Red 80 (Picrosirius Red) | SIGMA | 365548 | staining solution |
Bio Clear (clearing agent of terpene origin) | Bio-Optica | 06-1782D | product for the preparation of histological samples |
Eukitt Quick Hardening mounting medium (Poly(butyl methacrylate-co-methyl methacrylate) | SIGMA | 3989 | mounting solution |
Sodium Dodecyl Sulfate | Fluka | 71725 | powder |
Hydrogen Peroxide solution (30 %) | SIGMA | H1009 | solution |
Vectorstain ABC KIT including: anti-rabbit IgG ABC, normal rabbit serum, Secondary-biotinylated Anti-Rat IgG , | Vector Laboratories | PK-6100 | staining solution |
3-amino-9-ethylcarbazole | Vector Laboratories | SK-4200 | staining solution |
Mac3 antibody | BD Biosciences | 553322 | antibody |
ImagePro Premier 9 | Media Cybernetics | 050910000-2534 | software to analyze images |