PD L1 の発現を研究する同系の肺腺癌細胞の同所性同種移植
Summary
ここで非小細胞肺癌を勉強する時間とコスト削減モデルとしてマウス肺腺癌細胞の低侵襲同系同所性同種移植モデルについて述べる。
Abstract
マウス モデルの使用は様々 な疾患の病態生理を研究するため不可欠であります。肺癌に対するいくつかのモデルがあります、モデルだけでなく、移植モデルに設計遺伝子を含みます。ただし、遺伝子組み換えマウス モデルは時間がかかり、高価ないくつかの同所性同種移植モデルが再現しにくいに対しです。ここでは、代替同所性同種移植モデルとして肺腫瘍細胞の非侵襲的な気管の配信方法は記述されています。マウス肺腺癌細胞と同系移植の受信者の使用は、完全にアクティブな免疫システムの存在下で腫瘍を勉強できます。さらに、腫瘍の遺伝子操作は細胞移植になりますこのモデル, 腫瘍の増殖や腫瘍細胞の遺伝子発現の遺伝的要因の影響を研究する魅力的な時間節約アプローチは生理的条件下でプロファイルする前に。それ肺腺癌細胞を示す本モデルを用いた T 細胞サプレッサーの増加レベルを表現は、in vitro における栽培と比較して、自然の環境で栽培されたは死リガンド 1 (PD L1) プログラム。
Introduction
肺がんは男性と女性の両方の1で最大の癌関連キラーではまだまだです。確かに、アメリカの癌協会によると毎年多くの人々 は胸、前立腺および結腸癌の一緒に1のよりも肺癌で死ぬ。肺がんの最も豊富なサブタイプは、非小細胞肺癌 (NSCLC) 患者の大半が血管新生の主の最初の行設定でプラチナ ベースの化学療法で治療された最近まで、阻害剤2。患者のサブセットのみ未分化リンパ腫キナーゼ (アルク) または ROS1、上皮成長因子受容体 (EGFR) の発癌性突然変異を隠すし、利用可能なターゲット薬3,4と扱うことができます。免疫チェックポイント阻害剤の出現により、今までは、患者の 20-40% だけは免疫療法5に応答が、肺癌患者に新たな希望が生じた。それ故に、さらに研究は免疫チェックポイント療法を微調整し、組合せ治療オプションを調査してこの結果を改善するために必要です。
肺癌の研究、前臨床モデルの広大な配列があります、モデル (ジェム) の条件付きのアクティブ化後、土着の腫瘍が発生するの化学物質や発ガン性物質や遺伝子組み換えマウスによって引き起こされる自発的なモデルを含む遺伝子および/または腫瘍サプレッサーの遺伝子6,7,8の不活化。これらのモデルは、肺腫瘍の開発の基本的なプロセスを調査する特定の値が、繁殖、広範なマウスも必要になります、実験は時間がかかる。したがって、潜在的な阻害を評価する多くの研究はひと肺癌細胞株を免疫不全マウス9注入皮下皮下 (患者由来) 異種移植モデルの利点を取る。
これらのモデルで腫瘍の micromilieu は必要に応じては表されませんしたがって、研究者も使用する同所性同種移植モデルどこ肺実質10、11,12,13に静脈内投与、intrabronchially、または直接に、腫瘍細胞が挿入され、 14,15,16,17,18,19,20。これらのメソッドのいくつかは、技術的に困難な再現して研究者の集中的な訓練を必要とすることは困難です。21ここで我々 は非侵襲的な同所性気管移植による免疫マウス、腫瘍が 3 ~ 5 週間以内に開発して、T 細胞の発現を誘導するために、人間の腫瘍の重要な類似を表わす、適応抑制プログラム死リガンド 1 (PD L1) 腫瘍の細胞。11,12,20マウス腫瘍細胞の使用に由来するジェム モデルと同系の受信者マウスが免疫細胞を含む腫瘍微小環境の適切な研究をします。さらに、体外移植肺腫瘍の遺伝要因の影響の調査を容易にする前に、遺伝子編集 CRISPR/Cas9 技術22のようなツールは使用できます。
Protocol
Representative Results
Discussion
肺の肺生理学的および病理学的イベントを研究するには、様々 な試薬の注入のための侵襲的、非侵襲的な気管内挿管法が広く使われている26,27,28,29 ,30,31,32。がん分野で研究者は、気管を使用 (および鼻腔内) 肺上皮細?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、ティッシュ セクションの準備で彼女の助けのサフィア Zahma を感謝したいです。
Materials
| mouse lung adenocarcinoma cell line | isolated in house | ||
| C57Bl/6 mice | F1 of the cross of the two backgrounds may be used (8-12 weeks) | ||
| 129S mice | |||
| RPMI 1640 Medium | Life Technologies | 11544446 | |
| Fetal Calf Serum | Life Technologies | 11573397 | |
| Penicillin/Streptomycin Solution | Life Technologies | 11548876 | |
| L-Glutamine | Life Technologies | 11539876 | |
| Trypsin, 0.25% (1X) with EDTA | Life Technologies | 11560626 | |
| UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0 | Thermo Fisher Scientific | 15575020 | |
| Ketasol (100 mg/ml Ketamine) | Ogris Pharma | 8-00173 | |
| Xylasol (20 mg/ml Xylazine) | Ogris Pharma | 8-00178 | |
| BD Insyste (22GA 1.00 IN) | BD | 381223 | |
| Blunt forceps | Roboz | RS8260 | |
| Leica CLS150 LED | Leica | 30250004 | Fibre Light Illuminator |
| Student Iris Scissors | Fine Science Tools | 91460-11 | |
| DNase I (RNase-Free) | New England Biolabs | M0303S | |
| Collagenase Type I | Life Technologies | 17100017 | |
| ACK Lysing Buffer | Lonza | 10-548E | |
| CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoclonal Antibody (MIH5), PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-5982-82 | |
| Rat IgG2a kappa Isotype Control, PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-4321-82 |
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