Мы представляем детальный подход к выполнению сбора слюны, включая мышиных трахеостомические и изоляции трех основных слюнных желез.
Гипосаливация обычно наблюдается в аутоиммунные реакции Шёгрен синдром или следующие травмы излучения в больших слюнных желез. В этих случаях остаются вопросы относительно патогенеза заболевания и эффективных мероприятий. Оптимизированный метод, который позволяет функциональной оценки слюнных желез имеет неоценимое значение для изучения биологии экзокринной железы, дисфункции и терапии. Здесь мы представляем шаг за шагом подход к выполнению пилокарпин стимулирует секрецию слюны, включая трахеостомические и рассечение трех основных мышиных слюнных желез. Мы также подробно соответствующие мышиных анатомия головы и шеи, доступны во время этих методов. Этот подход является масштабируемой, позволяя для нескольких мышей, чтобы быть обработаны одновременно, повышая эффективность работы потока. Мы стремимся улучшить воспроизводимость этих методов, каждый из которых имеет дополнительные приложения в пределах области. Помимо сбора слюны мы обсуждаем метрики для количественной оценки и нормализации функционального потенциала этих тканей. Репрезентативных данных включены от подчелюстной желез с функцией депрессии слюнной железы 2 недель после фракционированный излучения (4 дозы 6.85 гр).
Нарушения слюнной железы включают синдромы dysregulated или нарушением секреции приводит к перепроизводству (sialorrhea) или недопроизводства (ксеростомия и гипосаливация) слюны1. В обоих случаях существует заинтересованность в улучшении нашего понимания слюнных желез биологии к конечной цели терапевтического развития2.
Слюнные железы являются весьма радиочувствительным органов и часто повреждены во время радиотерапии рака головы и шеи, приводит к постоянной сухость во рту (ксеростомия)3,4. В отличие от других радиочувствительным тканей однако, текучесть слюнных желез является относительно низким, и механизм секреторной потери является плохо понимали5,6. В этой обстановке уникальный травмы, ткани регенерации и радиационной безопасности стратегии требуют слюнных функциональной оценки. Экспериментально мышиных слюны коллекции является особенно ценным инструментом в оценке железы ответ к радиации и терапевтических агентов.
Здесь мы представляем метод для выполнения и количественного определения секреции стимулировали слюны, с помощью пилокарпин, мощным мускариновых агонист7. Пилокарпин стимулирует вегетативную нервную систему, чтобы побудить железы секреции8,9. Надлежащим образом выполнить этот тест, трахеостомические требуется обеспечить, что мышь поддерживает патент сократимость во всей процедуре и уменьшить риск удушья и аспирации от пула выделениями в полости10.
Это терминал процедура, кульминацией удаления трех основных слюнных желез: околоушной (PG), подчелюстной (SMG) и сублингвально (SLG). Для функциональных исследований записываются и часто используются для нормализации слюны измерения11,12,13железы весов. Эти данные особенно важна в радиационных исследований, которой атрофию желез является ожидаемый результат14,15
Изменчивость в литературе в отношении как стимулируется секреция слюны производится и сообщил16. Например пилокарпин дозы в литературе диапазона по меньшей мере трех порядков17,18,19,20,21,22,23. Здесь мы представляем оптимизированные высокие дозы пилокарпин протокола с целью улучшения воспроизводимость результатов выполнения метода, а также предоставление модульной платформы методов (трахеостомические, сбора слюны и железы рассечение), которые могут быть адаптированы, как требуется.
Помимо протокола демонстрации мы включить представителя функциональные данные слюны потока на 2 недели, после фракционированный излучения (4 дозы 6.85 Gy) в регионе SMG.
Мы представляем многоступенчатое метод для оценки функции слюнных желез, которые могут быть применены для изучения травмы железы и терапии. Наша процедура включает трахеостомические, сбора слюны и железы рассечение, каждая из которых имеет экспериментальных приложений, которые могут…
The authors have nothing to disclose.
Исследования в этой публикации было поддержано Национального Института стоматологии и челюстно-лицевой исследований (NIDCR) и национального института рака (NCI) национальных институтов здравоохранения под награду номер R56 DE025098, UG3 DE027695 и F30 CA206296. Содержание является исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальную точку зрения национальных институтов здоровья. Эта работа была также поддержана NSF DMR 1206219 и получила инновации в устной Уход награды (2016).
Мы хотели бы поблагодарить д-ра Eri Маруямы и Эндрю Холломон за их помощь в сборе слюны. Мы хотели бы поблагодарить Пей-Lun Weng за его помощь в железе рассечение. Мы хотели бы поблагодарить Мэтью Ingalls за его помощь в подготовке рис. Мы хотели бы поблагодарить д-ра Элейн Smolock и Эмили Ву для критических чтении этой рукописи.
Pilocarpine hydrochloride | Sigma Aldrich | P6503 | Pilocarpine |
Student Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 91500-9 | Spring Scissors for Tracheostomy |
Sterile Saline Solution | Medline | RDI30296H | Saline |
Dumont #7 Forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | Curved Forceps |
Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | Straight Forceps |
Standard Pattern Forceps | Fine Science Tools | 11000-12 | Blunt Forceps |
Fine Scissors- Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14568-09 | Dissection Scissors |
Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes | Fisher Scientific | 22362566 | Capillary tubes |
Lubricant Eye Ointment | Refresh | N/A | Refresh Lacri-Lube |
Goat polyclonal anti-Nkcc1 | Santa Cruz Biotech | SC-21545 | Nkcc1 Antibody |
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI |
GraphPad Prism | GraphPad | ver6.0 | Statistical Software |
Cotton tipped applicator | Medline | MDS202000 | Applicator for eye ointment |
0.5cc Insulin Syringe, 29G x 1/2" | BD | 7629 | Syringe for intraperitoneal injection |