異数性は、ゲノムの不安定性、複雑な染色体を持つ細胞を細胞周期逮捕を最終的に生成に します。このペーパーでは、複雑な染色体を分割するために停止を構成する細胞を分離する簡単で便利な方法を提供します。
染色体の誤った分離は、異数性、細胞が不均衡な染色体数を港を条件に します。証拠の複数のラインは強くその異数性をゲノムの不安定性は、最終的に彼らの増殖を阻止する複雑な染色体を持つ細胞を生成するトリガーを示します。細胞の複雑な染色体の分離と性状、細胞生理学的不均衡な染色体数の影響を検討することが重要です。日には、手法が確立されてないような構成する細胞を確実に分離します。このペーパーでは、標準の安価な培養技術を利用した複雑な染色体の濃縮と異数性細胞の解析のためのプロトコルを提供します。このプロトコルは、その誘導分泌老化関連の表現、プロ炎症性のプロパティ、および免疫細胞と対話する能力を含む複雑な染色体を構成する細胞のいくつかの機能を分析する使用することができます。がん細胞は、染色体数の不均衡をしばしば港、異数性が両方のプロと反 tumorigenic 効果を暴くの究極の目標と、正常細胞の細胞生理に及ぼす影響について解読することが重要です。
染色体分配の過程でエラーは、異数性半数体補1,2,3,4の倍数ではない染色体数によって特徴付けられる条件に します。異数性染色体ゲノム不安定性5,が生成されますさらにトリガーのレプリケーション ストレス6,7,8,9,10増加核型の複雑さ、および最終的に細胞10個体の細胞周期の停止につながる。ここで紹介した方法の目的を生成し細胞をサイクリングからこのような個体を分離です。安価な培養技術を採用し、このプロトコル分離と複雑な染色体の異数性細胞の細胞周期逮捕の評価が容易になります。これらの細胞は、ArCK (複雑核型で逮捕) セルおよびコントロールとしてサイクリング欠の相手として呼ばれます。
このプロトコルは、この目的のために確立される最初の 1 つを分離することができ、さらなる研究の ArCK 線を含む、彼らの誘導老化と老化関連の分泌形質 (SASP) に限定されない、プロ炎症機能、および能力を免疫細胞に関与します。ここで紹介した方法未変換、不死化ひと細胞で開発されていますが、がんでまだテストされていません。いくつかの変換されたセルが 1 つまたは複数の経路の抑制による細胞周期の停止に敏感である可能性があります。さらにしたがって、他の細胞では検証を実行する必要があります。
この新規メソッドを生成し、複雑な染色体 (弧) の逮捕された電池の豊かは、複数の染色体の利得または損失を持ち、分割停止細胞の研究のためことができます。方法セットアップは迅速かつ信頼性の高い方法で ArCK 細胞の分離を容易にする設計されています。
この試験で最も重要なステップは、薬物治療のタイムラインと、最も重要なは、構成するサイクリング細胞の除去厳密制御です。最適な結果を得るのためのノコダゾール治療と振るオフのタイミングは特に重要な彼らはまだ丸みを帯びたと分裂、G1 に分裂細胞死やスリッページの可能性を防止するプレートからサイクリングのセルを削除するには四倍体の人口を作成する可能性があります。推奨 12 h ノコダゾール インキュベーションから 2 時間以上を振り払いのタイミングに逸脱はお勧めできません。
将来に関する ArCK 細胞どのように複雑な染色体のより深い理解を促進する可能性がある細胞生理学に影響を与えます。特に、最近の研究は、免疫系の細胞と対話すること、トリガー免疫クリアランス ArCK の細胞10を示した。ここで述べる方法免疫クリアランス未変換細胞とどのように発癌の研究の基礎となる分子メカニズムの解明を含む ArCK セルのさらなる評価のため優秀な出発点を提供します。この監視のメカニズム、フィールド14,15の重大な質問をバイパスがあります。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、国内機関の健康の付与 (CA206157-22 と GM118066) とアンジェリカ アモンにぞんざいな大理石がん研究基金によってコッホ研究所サポート (コア) グラント P30 CA 14051 国立がん研究所から一部支持されました。アンジェリカ アモンもハワード ヒューズ医学研究所と医歯薬学研究グレン財団法人の捜査官です。アメリカ イタリアがん財団 (AICF)、マリー ・ キュリー ・ アクションから癌研究 (AIRC) のためのイタリアの協会がん研究の交わりによって、キ Quinquennial がん研究員、s. s. がサポートされていました。E. m. は、ハワード ヒューズ医学研究所から奨学金によって支えられました。
DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) | Thermofisher | 11995-073 | |
Thymidine | Sigma Aldrich | T1859 | |
Reversine | Cayman Chemical Company | 10004412 | |
Nocodazole | Sigma Aldrich | M1410 | |
Anti-p53 antibody | Santa Cruz | sc-126 | |
Anti-p21 antibody | Santa Cruz | sc-6246 | |
Anti-p16 antibody | BD | 554079 | |
Senescence b-Galactosidase Staining Kit | Cell Signaling Technology | 9860 | |
Proteome Profiler Human Cytokine Array Kit | R&D Systems | ARY005B |