Осуществление ортотопической модели почечно-клеточной карциномы в иммунокомпетентных мышах дает следователю клинически-соответствующую систему, определяемую наличием первичной опухоли почки и метастазов в легких в том же животном. Эта система может быть использована для доклинического тестирования различных методов лечения в естественных условиях.
Почечно-клеточный рак (ПКР) влияет на> 60000 человек в Соединенных Штатах ежегодно, и ~ 30% больных ПКР имеют множественные метастазы на момент постановки диагноза. Метастатического ПКР (МСКЦ) неизлечим, медиана выживаемости всего 18 месяцев. Иммунные на основе вмешательства (например, интерферон (IFN) и интерлейкин (ИЛ) -2) вызывают длительные реакции у части пациентов MRCC и мультикиназный ингибиторы (например, сунитиниба или сорафениб) или анти-VEGF – рецептор моноклональные антитела (MAB) являются в значительной степени паллиативный, а полные ремиссии редки. Такие недостатки в современной терапии для пациентов MRCC обеспечивают обоснование для разработки новых протоколов лечения. Ключевой компонент в доклинических испытаниях новых методов лечения MRCC является подходящей моделью для животных. Полезные функции, которые перепросматривать человеческое состояние включают первичную опухоль почек, почечный метастаз опухолей, а также интактную иммунную систему, чтобы исследовать любую терапию управляемого иммунные эффекторнымг реакция и образование опухоли, вызванные иммуносупрессивных факторов. Этот отчет описывает ортотопическую мышиную модель MRCC, которая имеет все эти функции. Опишем внутрипочечный технику имплантации с помощью мыши почечной аденокарциномы клеточной линии Ренка, а затем оценки роста опухоли в почках (основной сайт) и легких (метастатическим сайт).
Почечный – клеточный рак (ПКР) составляет для большинства злокачественных новообразований почек и примерно 3% от всех злокачественных новообразований у взрослых во всем мире 1, 2. Из – за отсутствия симптомов, неправильного диагноза, и недостаточные инструменты скрининга для РКС, почти у 30% пациентов будут представлены с метастатическим ПКР (MRCC) на момент постановки диагноза, с дополнительным 20-30% пациентов , прогрессирующих до метастатической стадии 2. Эти случаи приводят к ~ 13500 смертей в год 1, 3. Хотя ранее обнаружение и лечение первичного RCC улучшилось, скорость РКС-связанной смерти продолжает расти, предполагая , что метастатическое заболевание в значительной степени ответственны за смертностью 3. Развитие терапии ПКР прогрессировало в течение последнего десятилетия с открытием и реализацией целевых методов лечения и иммунотерапии. К сожалению, без прогрессирования survivаль и общая выживаемость запущенных случаев все еще хорошо в 2 -х года для большинства пациентов 4, 5, 6. Эти статистические данные говорят о необходимости дальнейших исследований в выявлении и разработке эффективных методов лечения ПКР. Для адекватного продвижения терапевтических вмешательств для MRCC, сначала необходимо поступательно-соответствующие доклинические модели заболевания.
Разработка соответствующей и последовательная модели резюмировать человеческое состояние передового RCC должен решить несколько ключевых вопросов: 1) Является ли модель анатомический отношением; 2) Есть ли прогресс опухоли по аналогии с человеческой патологии; 3) Есть ли метастазы возникают из первичной опухоли; и 4) Может прогрессирование первичного и метастатического опухолевого контролироваться с течением времени? В зависимости от типа лечения исследуется, линии опухолевых клеток мыши РКЦ, линии человеческих опухолевых клеток РКЦ и человека RCC пациента, полученных xenogплоты могут быть использованы в иммунокомпетентных или иммунодефицитных мышей. Хост с интактным и функциональной иммунной системы требуется для этих исследований , оценивающих некоторые аспекты иммунотерапии, что требует использования хорошо описанной клеточной линии , полученной из Ренка спонтанной почечной аденокарциномы BALB / C мышей 7. Большинство исследований впрыснуть Ренок клетки подкожно (SC), который образует простую в меру локальной опухоль, или внутривенно (IV) в мышей BALB / C для получения экспериментальных легких «метастазов» 8, 9, 10, 11, 12. Пользование подкожно имплантированных опухолей Ренка к модели человеческого РКЦ имеет ряд ограничений, в том числе неточной иннервации сосудов 13, различия в микросреде 14, 15, а также отсутствие органа / опухоли сотовой COMMUNICция 13, 16. Кроме того, многие SC опухоли (особенно Ренок) не метастазируют в дистальные органы, ингибируя исследование о событии , которое является общим клинической характеристикой 17. Для изучения MRCC, Ренка клетки могут быть введены внутривенно, чтобы установить бремя опухоли в легких-первичном месте метастазов у больных РСС. IV инъекционный метод инициирования метастатических опухолей, однако, не позволяет исследовать , как, когда и почему клетки мигрировали из первичного органа (т.е. почки) в отдаленном месте. Модель с первичным и метастатическим заболеванием очевидным в том же животном имеет решающее значение для изучения прогрессирования и лечения позднего стадии заболевания, особенно с учетом того, что метастазы обычно являются причиной смертности у этих пациентов.
Наша лаборатория разработала мышиную модель MRCC, которая включает в себя все функции, изложенные выше. Чтобы установить прimary, ортотопическая опухоль, клетки Ренка имплантирует непосредственно в почки животного через полупрозрачные брюшины. Небольшой разрез в левом боке позволяет для визуализации селезенки (как ориентир) и левой почки. С помощью небольшой иглы калибра, опухолевые клетки RENCA вводят непосредственно в почку через брюшину для ортотопической имплантации. По сравнению с другими методами имплантации клеток Ренка ниже капсулы 18 почек, этот способ имплантации обеспечивает более высокую пропускную способность , так как это довольно неинвазивным, не требует наложения швов, имеет низкий класс боли, а также занимает много времени эффективным , когда практикуется.
Это хорошо охарактеризованы результаты модели в воспроизводимом бремени первичной опухоли (~ 99% скорости отбора) в впрыскиваемого почек, а также метастатической опухолевой нагрузки в легких. Существенные преимущества этой модели включают его сингенный характер, что позволяет иммунотерапии исследованиям; его спонтанные метастазы, изучатьdvanced болезнь; и его ортотопическая имплантация, смоделировать анатомическое влияние на прогрессировании заболеваний и лечение. Методы лечения, направленные на нацеливание RCC бы извлечь большую пользу от использования этой модели в ходе доклинических развития.
Мы представляем протокол для ортотопической мышиной модели РКЦ. Имплантация мыши почечных опухолевых клеток аденокарциномы в почки мыши, обеспечивает клинически соответствующую модель MRCC. Эта модель приводит к первичной опухоли в почках и отдаленных метастазов в легких, оба из котор…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана грантами от Национального института рака (R15CA173657 к AW и R01CA109446 к TSG), Института рака (Simmons к AW) и Университета Minnestoa Подняться 4 рака почки Foundation (для TSG). Мы благодарим д-ра Кристин Андерсон за помощь в иммунофлюоресценции.
Artificial tears ophthalmic ointment | Akorn | NDC 17478-162-35 | |
Vetbond Tissue Adhesive | 3M | CBGBIW011019 | |
Betadine Solution (Povidone-iodine, 5%) | Purdue Products, L.P. | NDC 67618-155-32 | |
0.25% Marcaine (bupivavaine HCL injection) | Hospira | 0409-1587-50 | |
Heating pad | Sunbeam | ||
Syringes | BD | 309659 | |
Gauze | Venture | 908291 | |
Ketamine | Phoenix Pharmaceuticals | NDC 57319-609-02 | |
Xylazine | Akorn | NDC 59399-111 | |
Hank’s Balanced Salts | Sigma-Aldrich | H2387 | |
IVIS | Caliper | ||
D-Luciferin, Potassium Salt | GoldBio | LUCK-1G | |
India Ink | Chartpak Inc | 44201 | |
Scissors | |||
Forceps | |||
Sleeping Beauty (SB) transposon system | Neuromics | SBT0200 | |
Renca | ATCC | CRL-2947 |