Implementação de um modelo ortotópico de carcinoma de células renais, em ratinhos imunocompetente proporciona o investigador um sistema clinicamente relevante definida pela presença de um primárias metástases tumorais e pulmonares renais no mesmo animal. Este sistema pode ser usado para testar pré-clinicamente uma variedade de tratamentos in vivo.
carcinoma de células renais (RCC) afeta> 60.000 pessoas nos Estados Unidos anualmente, e ~ 30% dos pacientes com CCR têm múltiplas metástases no momento do diagnóstico. Metastático RCC (mRCC) é incurável, com um tempo médio de sobrevivência de apenas 18 meses. Intervenções imunológicas baseadas em (por exemplo, o interferão (IFN) e interleucina (IL) -2) induzir respostas duradouras em uma fracção de pacientes mRCC, e inibidores multiquinase (por exemplo, sunitinib ou sorafenib) ou anti-receptor de VEGF anticorpos monoclonais (mAbs) são em grande medida paliativa, como remissões completas são raras. Tais deficiências em terapias actuais para doentes mRCC proporcionar a base racional para o desenvolvimento de novos protocolos de tratamento. Um componente chave na testes pré-clínicos de novas terapias para mRCC é um modelo animal adequado. características benéficas que recapitulam a condição humana incluem um tumor primário renal, metástases de tumores renais, e um sistema imune intacto para investigar qualquer effecto imune accionada-terapiarespostas r e a formação de factores imunossupressores induzida por tumor. Este relatório descreve um modelo de camundongo ortotópico mRCC que tem todos esses recursos. Descrevemos uma técnica de implante intra-renal utilizando o rato renal linha celular de adenocarcinoma Renca, seguindo-se a avaliação do crescimento tumoral no rim (sítio primário) e pulmões (local metastático).
Carcinoma de células renais (RCC) é responsável pela maioria das neoplasias malignas nos rins e aproximadamente 3% de todas as malignidades adultos no mundo inteiro 1, 2. Devido à falta de sintomas, diagnóstico errado, e ferramentas de rastreio insuficientes para RCC, quase 30% dos pacientes apresentarão com RCC metastático (CCRm) no momento do diagnóstico, com um 20-30% adicional de pacientes que evoluíram para um estágio metastático 2. Estes casos resultam em ~ 13.500 mortes por ano 1, 3. Embora a detecção e tratamento de carcinoma de células renais primário anterior melhorou, a taxa de morte relacionada com o RCC continua a aumentar, o que sugere que a doença metastática é em grande parte responsáveis pela mortalidade 3. desenvolvimento terapia para RCC progrediu na última década com a descoberta e implementação de terapias direcionadas e imunoterapias. Infelizmente, surviv livre de progressãoai e sobrevivência global dos casos avançados ainda são bem menores de 2 anos para a maioria dos doentes com 4, 5, 6. Estas estatísticas justificam a necessidade de mais investigação sobre a identificação e desenvolvimento de tratamentos eficazes para RCC. Para avançar adequadamente intervenções terapêuticas para mRCC, modelos pré-clínicos traducionalmente relevantes da doença são primeiro necessário.
Desenvolvimento de um modelo relevante e consistente para recapitular a condição humana de CCR avançado deve abordar várias questões-chave: 1) é o modelo anatomicamente relevante; 2) A progresso do tumor de forma semelhante à patologia humana; 3) Fazer metástases surgir a partir do tumor primário; e 4) pode progressão do tumor primário e metastático ser monitorado ao longo do tempo? Dependendo do tipo de tratamento a ser investigados, as linhas de rato tumorais RCC celulares, linhas celulares de tumores humanos, e RCC RCC xenog humana derivada de pacientejangadas pode ser usado em ratos imunocompetentes ou imunodeficientes. Um hospedeiro com um sistema imunitário intacto e funcional é necessário para aqueles estudos que avaliaram a algum aspecto da imunoterapia, que implique a utilização da linha de células Renca bem descrito derivada de um adenocarcinoma renal espontâneo de ratinhos Balb / c 7. A maioria dos estudos de injectar células Renca por via subcutânea (SC), que forma um local do tumor fácil de medida, ou por via intravenosa (iv) em ratos Balb / c para produzir experimentais pulmonares "metástases" 8, 9, 10, 11, 12. Uso de um tumor Renca implantou-sc para modelar RCC humana tem um número de limitações, incluindo inervação impreciso da vasculatura 13, as diferenças em microambiente 14, 15, e uma falta de órgão / tumor Communic celularção 13, 16. Além disso, muitos tumores sc (especialmente Renca) não metastizar para órgãos distantes, inibindo o estudo de um evento que é uma característica comum clínico 17. Para estudar mRCC, culas RENCA pode ser injectado iv para estabelecer a carga de tumor nos pulmões-o local principal de metástases em doentes RCC. O método de injecção iv de iniciar tumores metastáticos, no entanto, não permite a investigação de como, quando, ou porque as células migraram do órgão primário (isto é, o rim) para o local distante. Um modelo com ambas as doenças primário e metastático evidente no mesmo animal é crucial para estudar a progressão e tratamento de doença avançada, especialmente considerando que as metástases são tipicamente a causa de mortalidade nesses pacientes.
Nosso laboratório desenvolveu um modelo murino de mRCC que incorpora todas as características acima descritas. Para estabelecer prtumores imary, ortotópicos, células Renca são implantadas directamente no rim do animal através do peritoneu translúcido. Uma pequena incisão no flanco esquerdo permite a visualização do baço (como uma referência) e o rim esquerdo. Utilizando uma agulha de calibre pequeno, as células de tumor Renca são injectados directamente no rim através do peritoneu para implante ortotópico. Em comparação com outros métodos de implantação de células Renca abaixo da cápsula renal 18, este método de implantação permite um caudal mais elevado, uma vez que é relativamente não invasivo, não requer sutura, é de uma classe de dor, e é eficiente tempo quando praticada.
A bem caracterizados os resultados do modelo de carga primário reprodutível tumoral (~ 99% taxa de absorção) no rim injectado, bem como carga de tumor metastático nos pulmões. As vantagens significativas deste modelo incluem a sua natureza singeneicos, permitindo para as investigações de imunoterapia; as suas metástases espontâneas, para estudar umdoença dvanced; e a sua implantação ortotópica, para modelar o impacto anatómica na progressão da doença e do tratamento. Terapias destinadas a alvejando RCC beneficiariam muito a utilização deste modelo durante o desenvolvimento pré-clínico.
Apresenta-se um protocolo para um modelo de ratinho RCC ortotópico. O implante de células tumorais de adenocarcinoma renal de ratinho na rim de ratinho proporciona um modelo clinicamente relevante da mRCC. Este modelo resulta num tumor primário dentro do rim e metástases distantes nos pulmões, os quais são características de CCR avançado. A descrição aqui apresentada é específico para a linha de células Renca em imunocompetentes ratinhos Balb / c. Usando este modelo ortotópico, mostrámos que os tumores Re…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi financiado por doações do Instituto Nacional do Câncer (R15CA173657 para AW e R01CA109446 para TSG), o Instituto do Câncer Simmons (a AW), e da Universidade de Minnestoa Suba Cancer Foundation 4 Kidney (a TSG). Agradecemos ao Dr. Kristin Anderson para a assistência com a imunofluorescência.
Artificial tears ophthalmic ointment | Akorn | NDC 17478-162-35 | |
Vetbond Tissue Adhesive | 3M | CBGBIW011019 | |
Betadine Solution (Povidone-iodine, 5%) | Purdue Products, L.P. | NDC 67618-155-32 | |
0.25% Marcaine (bupivavaine HCL injection) | Hospira | 0409-1587-50 | |
Heating pad | Sunbeam | ||
Syringes | BD | 309659 | |
Gauze | Venture | 908291 | |
Ketamine | Phoenix Pharmaceuticals | NDC 57319-609-02 | |
Xylazine | Akorn | NDC 59399-111 | |
Hank’s Balanced Salts | Sigma-Aldrich | H2387 | |
IVIS | Caliper | ||
D-Luciferin, Potassium Salt | GoldBio | LUCK-1G | |
India Ink | Chartpak Inc | 44201 | |
Scissors | |||
Forceps | |||
Sleeping Beauty (SB) transposon system | Neuromics | SBT0200 | |
Renca | ATCC | CRL-2947 |