יישום מודל orthotopic של קרצינומה של תאי כליה בעכברים עם מערכת חיסון תקינים מקנה החוקר מערכת קלינית רלוונטית המוגדרת על ידי הנוכחות של גרורות גידול ריאות כליות עיקריות באותה החיה. מערכת זו יכולה לשמש כדי preclinically לבדוק מגוון של טיפולים in vivo.
קרצינומה של תאי כליה (RCC) משפיעה> 60,000 אנשים בארצות הברית מדי שנה, ו ~ 30% מחולי RCC יש גרורות מרובות בעת האבחנה. RCC גרורתי (mRCC) הוא חשוך מרפא, עם זמן הישרדות החציוני של רק 18 חודשים. התערבויות מבוססות חיסוניות (למשל, אינטרפרון (IFN) ו interleukin (IL) -2) לגרום לתגובות עמידות בשבריר של חולי mRCC, ומעכבי multikinase (למשל, sunitinib או sorafenib) או הקולטן אנטי VEGF נוגדנים חד שבטיים (מב) הם בעיקר פליאטיבי, כמו הפוגות להשלים הם נדירים. חסרונות כאלה טיפולים נוכחיים לחולי mRCC לספק את הרציונל לפיתוח פרוטוקולי טיפול חדשניים. מרכיב מרכזי בניסויים פרה-קליניים של טיפולים חדשים עבור mRCC הוא מודל החיה מתאימה. תכונות מועילות כי לשחזר את המצב האנושי כוללות גידול כלייתי עיקרי, גרורות גידול כליות, ומערכת חיסון שלמה לחקור כל effecto חיסון מונע טיפולתגובות r ויצירת גורמים לדיכוי חיסוניים-induced גידול. דו"ח זה מתאר מודל עכבר orthotopic mRCC כי יש את כל התכונות הללו. אנו מתארים טכניקת השתלת intrarenal באמצעות שורת תאי אדנוקרצינומה עכבר כליות Renca, ואחריו ההערכה של גידול בכליה (האתר הראשי) וריאות (אתר גרורתי).
קרצינומה של תאי הכליה (RCC) מהווה את רוב שאתות כליות ממאירים ו בערך 3% מכלל המחלות הממאירות מבוגרים ברחבי העולם 1, 2. בשל חוסר תסמינים, אבחון מוטעה, וכלי הקרנה מספיק RCC, כמעט 30% מחולים יציגים עם גרורתי RCC (mRCC) בעת האבחנה, עם מטופלים 20-30% של תוספת התקדמות לשלב גרורתי 2. במקרים אלה לגרום ~ 13,500 מקרי מוות בשנה 1, 3. למרות מוקדם איתור והטיפול הראשוני RCC השתפר, שיעור מוות קשור RCC ממשיך לגדול, מה שמרמז כי מחלה גרורתית היא אחראית במידה רבה תמותה 3. פיתוח תרפים עבור RCC התקדם בעשור האחרון עם הגילוי והיישום של טיפולי immunotherapies ממוקדים. למרבה הצער, surviv ללא התקדמותאל והישרדות כוללת של מקרים מתקדמים עדיין היטב מתחת 2 שנים עבור רוב המטופלים 4, 5, 6. נתונים אלה להצדיק את הצורך במחקר נוסף לתוך זיהוי ופיתוח של טיפולים יעילים עבור RCC. כדי לקדם התערבויות טיפוליות כראוי mRCC, מודלים טרום קליניים translationally-רלוונטיים של המחלה יש צורך תחילה.
פיתוח מודל רלוונטי ועקבי כדי לשחזר את המצב האנושי של מתקדמי RCC צריך לענות על שאלות מרכזיות: 1) האם המודל רלוונטי מבחינת אנטומית; 2) האם התקדמות הגידול בדומה הפתולוגיה האנושית; 3) האם גרור להתעורר מן הגידול הראשוני; ו 4) יכול התקדמות הגידול הראשוני גרורתי להיות במעקב לאורך זמן? בהתאם לסוג טיפול נחקר, שורות תאים סרטניים עכבר RCC, שורות תאים סרטניים אנושיות RCC, ואת xenog האנושי RCC נגזרות החולותרפסודות עשויות לשמש ב עכברים או immunodeficient. שורה עם מערכת חיסונית שלמה ומתפקדת נדרשת ללימודים אלה בהערכת היבט כלשהו של טיפול חיסוני, יש צורך בהפעלת הקו הסלולרי Renca היטב תאר נגזר אדנוקרצינומה כליות ספונטנית של עכברי Balb / ג 7. רוב המחקרים להזריק תאי Renca תת-עורית (SC), אשר מהווה גידול מקומי קל למדוד, או דרך וריד (IV) לעכברי Balb / c כדי לייצר "גרורות" ניסיוני ריאות 8, 9, 10, 11, 12. שימוש גידול SC-מושתל Renca מודל האנושי RCC יש מספר המגבלות, כולל עצבוב מדויק של כלי דם 13, הבדלי microenvironment 14, 15, וחוסר האיבר / תקשורת סלולרית גידול13 ation, 16. בנוסף, גידולים SC רבים (במיוחד Renca) לא גרורות לאיברים דיסטלי, עיכוב חקר אירוע הוא 17 מאפיין קליני נפוץ. כדי ללמוד mRCC, תאים Renca ניתן להזריק iv להקים נטל הגידול של הריאות-המיקום הראשוני של גרורות בחולי RCC. שיטת הזרקת IV של ייזום גרור, אולם, אינה מאפשרת את החקירה איך, מתי, או מדוע התאים הגרו האיבר העיקרי (כלומר, הכליות) לאתר המרוחק. דגם עם שני מחלות הראשוניות גרורתי ניכר החיה אותה הוא חיוני כדי ללמוד את ההתקדמות וטיפול במחלה מתקדמת, במיוחד בהתחשב בכך הגרורות בדרך כלל הגורם לתמותה בחולים אלה.
המעבדה שלנו פיתחה מודל בעכברים של mRCC המשלב את כל התכונות שתוארו לעיל. כדי לבסס יחסי ציבורגידולי imary, orthotopic, תאי Renca מושתלים ישירות לתוך הכליה של החיה דרך הצפק השקוף. חתך קטן האגף השמאלי מאפשר הדמיה של הטחול (כציון דרך) ואת הכליה עזבה. באמצעות מחט קטנה-מד, תאים סרטניים Renca מוזרקים ישירות לתוך הכליה דרך הצפק להשתלה orthotopic. בהשוואה לשיטות אחרות של השתלת תאי Renca מתחת הקפסולה כליות 18, שיטה זו של השתלה מאפשרת תפוקה גבוהה יותר, כפי שהוא די בלתי פולשני, אינו דורש תפירה, היא של כיתת כאב נמוכה, והוא זמן יעיל כאשר מְתוּרגָל.
מאופיין היטב זה תוצאות מודל נטל גידול ראשוני לשחזור (~ 99% בשיעור מיצוי) בכליות המוזרקות כמו גם עומס גרור סרטני הבריאות. היתרונות המשמעותיים של מודל זה כוללים טבע syngeneic שלה, המאפשרים חקירות חיסוניות; הגרורות הספונטניות שלה, ללמודמחלת dvanced; השתלת orthotopic שלה, למדל את ההשפעה אנטומיים על התקדמות וטיפול במחלה. טיפולים שמטרתם מיקוד RCC יפיקו תועלת רבה מן הניצול של מודל זה במהלך פיתוח פרה-קליני.
אנו מציגים פרוטוקול מודל העכבר RCC orthotopic. השרשה של תאים סרטניים אדנוקרצינומה עכבר כליות לתוך כלית העכבר מספקת מודל קליני רלוונטי של mRCC. מודל זה גורם הגידול הראשוני בתוך כליות גרורות מרוחקות של הריאות, אשר שניהם הם מסימני ההיכר של מתקדמים RCC. התיאור המובא כאן הוא ספציפי …
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמכון הלאומי לסרטן (R15CA173657 ל- AW ו R01CA109446 כדי TSG), מכון הסרטן סימונס (כדי AW), ואוניברסיטת Minnestoa לטפס 4 כליות קרן סרטן (כדי TSG). אנו מודים לד"ר קריסטין אנדרסון לסיוע עם immunofluorescence.
Artificial tears ophthalmic ointment | Akorn | NDC 17478-162-35 | |
Vetbond Tissue Adhesive | 3M | CBGBIW011019 | |
Betadine Solution (Povidone-iodine, 5%) | Purdue Products, L.P. | NDC 67618-155-32 | |
0.25% Marcaine (bupivavaine HCL injection) | Hospira | 0409-1587-50 | |
Heating pad | Sunbeam | ||
Syringes | BD | 309659 | |
Gauze | Venture | 908291 | |
Ketamine | Phoenix Pharmaceuticals | NDC 57319-609-02 | |
Xylazine | Akorn | NDC 59399-111 | |
Hank’s Balanced Salts | Sigma-Aldrich | H2387 | |
IVIS | Caliper | ||
D-Luciferin, Potassium Salt | GoldBio | LUCK-1G | |
India Ink | Chartpak Inc | 44201 | |
Scissors | |||
Forceps | |||
Sleeping Beauty (SB) transposon system | Neuromics | SBT0200 | |
Renca | ATCC | CRL-2947 |