II-45 singenik Rat Mezotelyoma Modelinde Ortotopik Yerleştirilmesi ve Periferik Bağışıklık Hücre İzleme
Summary
Bağışıklık yetkili sıçanların plevra boşluğuna II-45 mezotelyoma hücrelerin nakledilmesi ile plevra malign mezotelyoma ortotopik sıçan modelinin üretimi sunulmuştur. Bir akış sitometrik yöntemi de tanımlanan bir 25 ul kan örneğinden, bu hayvanlarda, yedi immün hücre alt analiz etmek.
Abstract
Bu tür aşıların ve bağışıklık kontrol noktası inhibitörleri ve tedavi yanıt tümör mikro rolü artmış anlayış kanseri için bağışıklık bazlı tedavilerde ilgi muazzam kabarış, toplu klinik öncesi testler için immün yetkili ortotopik modellere ihtiyaç işaret Bu yeni tedavilerin. Bu yazıda plevral malign mezotelyoma ortotopik bağışıklık yetkili sıçan modeli kurmak için nasıl gösterir. Ortotopik modellerde İzleme hastalığın ilerlemesi tümörlerin iç konuma göre şaşırmış. Uzunlamasına hastalığın ilerlemesini bu ve diğer kanser fare modellerinde immün hücreleri, dolaşımdaki üzerindeki etkisini izlemek için, tek bir tüp sadece 25 ul tam kan açıklanan gerektiren tahlilinde akış sitometrisi. Toplam lenfositler, monositler ve nötrofiller, hem de T-hücre alt CD4 ve CD8, B-hücreleri ve doğal katil hücreler: bu, doğru yedi bağışıklık parametrelerinin ölçümü sağlar. Farklı subsBu parametrelerin ets mezotelyoma modelde hastalığın ilerlemesinin izlenmesi için en büyük yararı olan lenfosit oranı nötrofil ile farklı koşulları ve model yararlıdır. Ayrıca bağışıklık bazlı tedavilere yanıtın izlenmesinde ve tedavi başarı ya da başarısızlığa yol açan altta yatan mekanizmaların anlaşılmasında yardımcı olabilir bu tek tüp yöntemi kullanarak bağışıklık hücre düzeylerinin dolaşan Analiz.
Introduction
Malign mezotelyoma (MM) membran (mesothelium) dönüştürülmüş hücrelerden kaynaklanan saldırgan malignite olduğu satırları akciğer ve karın boşlukları, kalp ve iç üreme organları ve akciğer boşluğuna veya plevra 1,2 en sık görülen primer tümör . Asbest liflerine maruz kalma tüm MM% 80'ini ve asbest kullanımına ilişkin yasakları en batı ülkelerinde yıl önce tanıtıldı olurken, toplumdaki yaygın kullanımı ölümcül bir miras bırakmıştır. Dünya Sağlık Örgütü 107.000 kişi dünya çapında artmaya devam ölüm oranları ile, asbest ilgili hastalıklar her yıl ölmektedir tahmin ediyor. Yeni bir meslek dışı insidans dalgası da ortaya çıkmaktadır ve bu 3 zirve zaman ve hangi düzeyde küçük anlayış var.
Sistemik kemoterapi tek geçerli seçenek 4 birini temsil ettiğinde MM ile insanların büyük çoğunluğu geç teşhis edilir. En effectikemoterapi ve (cisplatin 5 ile birlikte pemetrexed) geçerli 'bakım standardını' ziyaretinde 10 yıl önce tespit edilmiştir. Bu tedavinin Ancak başarısızlık kaçınılmazdır ve sadece 12 ay 2 sert bir prognoz ve medyan sağkalım hastaları bırakarak kanıtlanmış ikinci satırı seçenekleri vardır. Bu nedenle, daha etkin tedavi için acil bir karşılanmamış bir ihtiyaç vardır. Klinik çalışmalarda yeni tedavilerin bir dizi incelemede karşın, hiçbiri uygulamada değişiklikler ile sonuçlanmıştır. Bu klinik 6-8 ayar genellikle ksenograft fare modellerinde gerçekleştirilen ön klinik sonuçlar, düşük (% 5) aktarım, kısmen bağlıdır. Bu tür modeller sadakatle sıklıkla bağışıklık sistemi 9 yokluğunda, fizyolojik olmayan yerlerde meydana gelen tümör mikro-ortamınm karmaşık yönleri özetlemek yoktur.
Singenik ortotopik modeller c göre belirgin daha gerçekçi tümör ortamı yaratmaktümörler bozulmamış bağışıklık sistemi 10,11 ile doğru fizyolojik konumda ortaya gibi ommonly derialtı ksenograft modelleri kullanılmaktadır. Sıçan büyük boyutta özellikle seri kan tedavi yanıtını ve toksisite 12 değerlendirmek için gerekli olan berabere ilaç çalışmalarında, bir kemirgen hastalık modeli olarak kullanımını geliştirir. Bundan başka, bir model olduğu hastalık ilerlemesini takip dolaşımda bulunan faktörler son derece çekici kullanılarak hastalığın ilerlemesini izlemek için yeteneği nedeniyle, (plevral boşluğuna gibi) tümörlerin konuma zordur. Bağışıklık yetkili fareler kullanılarak plevral mezotelyoma bir singenik ortotopik model üretimi tarif edilmektedir. Buna ek olarak, dolaşımdaki immün hücre ölçülerek plevral hastalığı ilerlemesinin izlenmesi için kolay ve göreceli olarak invazif olmayan bir yöntem de tarif edilmektedir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu yazıda plevral mezotelyoma bir sıçan singenik ortotopik model ve boyuna kan örneklemesi yoluyla hastalığın ilerlemesini izlemek için basit bir yöntem oluşturulması için bir yöntem ayrıntıları.
II-45 modeli asbest liflerine 13 Fischer 344 fareleri açığa tarafından geliştirilmiştir. Bu poz mezotelyoma patogenezinde konak-asbest bağışıklık sistemi etkileşimlerinin gerçek dinamiklerini temsil rağmen, uzun bir gecikme süresi (üretmek için yıllar ala…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The syngeneic rat mesothelioma II-45 cell line was a kind gift from A/Prof. Emanuela Felley-Bosco, Zurich University.
Materials
| EDTA Collection tube (0.5ml) | Greiner Bio One GmbH | 450480 | |
| Rat T/B/NK Cell cocktail | BD Pharmingen | 558509 | anti-Rat CD3 APC (IgM clone 1F4), anti-Rat CD45RA Fitc (IgG1 clone OX-33), anti-Rat CD161a PE (IgG1 Clone 10/78) |
| anti-RAT CD8a PE | Biolegend | 200608 | (IgG1vClone G28) |
| anti-Rat CD4 FITC (Domain 1) | Biolegend | 203406 | (IgG1 Clone OX-38) |
| anti-Rat CD45 PE/Cy7 | Biolegend | 202214 | (IgG1 Clone OX-1) |
| TruCount™ Tubes | Becton Dickinson | 340334 | Box of 50 absolute counting tubes |
| RPMI 1640 media | Life Technologies | 11875-119 | |
| foetal bovine serum (FBS) | Scientifix | FBS500-S (lot# 010101-1) | |
| trypsin-EDTA | Life Technologies | 15400-054 | |
| PBS tablets | Medicago AB | 09-9400-100 | |
| 23Gx1¼ Needle | Becton Dickinson | 302008 | |
| 1mL Syringe | Becton Dickinson | 302 100 | |
| Fischer 344 Rat | Animal Resources Centre, Perth Australia | F344 | |
| I.S.O (Isoflurane USP) | Veterinary Companys Australia (VCA) | B7058 | |
| II-45 Rat Mesothelioma line | Zurich University | Note: The cell line was given as a gift and is not commercially available at the ATCC | |
| FACSCalibur™ 4 colour | Becton Dickinson | 342975 | |
| TRIS-HCL | SIGMA | T3253 | |
| Ammonium Chloride | SIGMA | 9718 | |
| Anaesthetic Machine (The stinger) | Advanced Anaesthesia specialists | #00449 |
References
- Kao, S. C., et al. Malignant mesothelioma. Intern Med J. 40 (11), 742-7450 (2010).
- Zucali, P. A., et al. Advances in the biology of malignant pleural mesothelioma. Cancer Treat Rev. 37 (7), 543-558 (2011).
- Olsen, N. J., et al. Increasing incidence of malignant mesothelioma after exposure to asbestos during home maintenance and renovation. Med J Aust. 195 (5), 271-274 (2011).
- Zucali, P. A., et al. Thymidylate synthase and excision repair cross-complementing group-1 as predictors of responsiveness in mesothelioma patients treated with pemetrexed/carboplatin. Clin Cancer Res. 17 (8), 2581-2590 (2011).
- Vogelzang, N. J., et al. Phase III study of pemetrexed in combination with cisplatin versus cisplatin alone in patients with malignant pleural mesothelioma. J Clin Oncol. 21 (14), 2636-2644 (2003).
- Lowenstein, P. R., Castro, M. G. Uncertainty in the translation of preclinical experiments to clinical trials. Why do most phase III clinical trials fail?. Curr Gene Ther. 9 (5), 368-374 (2009).
- Kamb, A. What’s wrong with our cancer models. Nat Rev Drug Discov. 4 (2), 161-165 (2005).
- Yakisich, J. S. An Algorithm for the Preclinical Screening of Anticancer Drugs Effective against Brain Tumors. ISRN Pharmacol. 2012, 513580 (2012).
- Basu, D., Herlyn, M. Defining microenvironments within mouse models that enhance tumor aggressiveness. Cancer Biol Ther. 8 (4), 380-381 (2009).
- Abolhassani, M., et al. Screening of well-established drugs targeting cancer metabolism: reproducibility of the efficacy of a highly effective drug combination in mice. Invest New Drugs. 4 (4), 1331-1342 (2011).
- Hudson, A. L., et al. Establishing a panel of chemo-resistant mesothelioma models for investigating chemo-resistance and identifying new treatments for mesothelioma. Sci Rep. 4, 6152 (2014).
- Iannaccone, P. M., Jacob, H. J. Rats!. Dis Model Mech. 2 (5-6), 206-210 (2009).
- Craighead, J. E., et al. Characteristics of tumors and tumor cells cultured from experimental asbestos-induced mesotheliomas in rats. Am J Pathol. 129 (3), 448-462 (1987).
- Hunter, S. D., et al. Lymphocyte subset analysis by Boolean algebra: a phenotypic approach using a cocktail of 5 antibodies and 3 color immunofluorescence. Cytometry. 15 (3), 258-266 (1994).
- Brando, B., et al. Cytofluorometric methods for assessing absolute numbers of cell subsets in blood. European Working Group on Clinical Cell Analysis. Cytometry. 42 (6), 327-346 (2000).
- Schnizlein-Bick, C. T., et al. Evaluation of TruCount absolute-count tubes for determining CD4 and CD8 cell numbers in human immunodeficiency virus-positive adults. Clin Diagn Lab Immunol. 7 (3), 336-343 (2000).
- Gajkowska, A., et al. Flow cytometric enumeration of CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells in leukapheresis product and bone marrow for clinical transplantation: a comparison of three methods. Folia Histochem Cytobiol. 44 (1), 53-60 (2006).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144 (5), 646-674 (2011).
- Kao, S. C., et al. High blood neutrophil-to-lymphocyte ratio is an indicator of poor prognosis in malignant mesothelioma patients undergoing systemic therapy. Clin Cancer Res. 16 (23), 5805-5813 (2010).
- Kao, S. C., et al. Validation of prognostic factors in malignant pleural mesothelioma: a retrospective analysis of data from patients seeking compensation from the New South Wales dust diseases board. Clin Lung Cancer. 14 (1), 70-77 (2013).
- Burt, B. M., et al. Circulating and tumor-infiltrating myeloid cells predict survival in human pleural mesothelioma. Cancer. 117 (22), 5234-5244 (2011).
- Weir, C., et al. Streptavidin: a novel immunostimulant for the selection and delivery of autologous and syngeneic tumor vaccines. Cancer Immunol Res. 2 (5), 469-479 (2014).
